艾狄斯25羟基维生素D酶 联免疫检测试剂盒 |
要点和解释 |
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检测前将所有试剂平衡至室温,小心混匀。
按照“试剂准备”中所述,复溶或准备相关试剂。
1. 准备已作标记的玻璃试管或聚丙烯管用以标准品、质控品和样本的稀释。
2. 标准品、质控品和样本各取25μl分别加入到相应标记的试管。
3. 所有试管都再加入1ml的25D生物素。用漩涡混合器混合10秒。
4. 各取200μl已稀释的标准品、质控品或样本分别加入已包被抗体的相应酶标板微孔内,做双孔。用封口膜密封酶标板,于18-25℃下孵育2小时。
5. 用稀释好的洗液洗板3次。
a) 自动洗板:设置洗板机分配每孔至少300μl洗液。注满后抽空,如此循环3次。
b) 手动洗板:迅速颠倒倒出孔内物。每孔加入250μl洗液。再重复洗板2次。
在进入下一步之前,于吸水纸上用力拍打倒置的板以除去多余的洗液 。
6. 用多道移液器向所有微孔内加入200μl酶结合物。用封口膜密封酶标板,于18-25℃下孵育30分钟。
7. 重复步骤5。
8. 用多道移液器向所有微孔内加入200μl TMB底物,用封口膜密封酶标板,于18-25℃下孵育30分钟。
9. 用多道移液器向所有微孔内加入100μ终止液。
10. 加入终止液后的30分钟内在酶标仪450nm(参考650nm)波长处测量吸光度。
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