大鼠Insulin定量EIA试剂盒使用说明
2011-08-01 来源:本站 点击次数:1609上海西唐生物科技有限公司 021-55229872, 65333639 www.westang.com
大鼠Insulin定量EIA试剂盒使用说明
原理
本实验采用双抗体夹心 ELISA法。用抗大鼠Insulin单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的 Insulin与单抗结合，加入酶标抗体，形成免疫复合物连接在板上，加入酶底物TMB，出现蓝色，加终止液硫酸，颜色变黄，在450nm处测OD值，Insulin浓度与OD值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中Insulin浓度。
试剂盒组成（2-8℃保存）
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酶标板（Coated Wells）
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96孔
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酶标抗体工作液（Enzyme Conjugate）
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6ml
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标准品（Standards）：6瓶
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一套
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20×浓缩洗涤液（Wash Buffer）
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50ml
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封板纸
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一张
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底物工作液（TMB Solution）
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12ml
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坐标纸
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一张
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终止液（Stop Solution）
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12ml
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准备试剂与收集血样
1. 收集标本：血清、血浆（EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测，2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20 ℃或-70 ℃）保存，避免反复冻融。
2. 标准品第一次使用时用0.5ml的蒸馏水溶解，放置半小时混匀后使用，用后放在-20oC保存。溶解后浓度分别为14、8、3.2、1.6、0.8、0 ng/ml。
3. 标本如果需要稀释可以用蒸馏水稀释。
4. 洗涤液：用重蒸水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水）
检测程序
1. 建立标准曲线：设标准孔6孔，每孔各加入标准品50ul。
2. 加样：待测品孔每孔各加入待测样品50ul。
3. 每孔加酶标抗体工作液50ul。将反应板置37℃120分钟。(室温过夜可以提高灵敏度)
4. 洗板：同前。
5. 每孔加入底物工作液100ul，置37 ℃暗处反应15分钟。
6. 每孔加入100ul终止液混匀。
7. 30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。
结果计算与判断
1. 所有OD值都应减除空白值后再行计算。
2. 以标准品14、8、3.2、1.6、0.8、0ng/ml为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上作图，画出标准曲线。
3. 根据样品OD值在该曲线图上查出相应Insulin含量。
试剂盒性能
1. 灵敏度：最小的Insulin 检测浓度小于0.4ng/ml。
2. 特异性：可同时检测重组或天然的大鼠Insulin。不与大鼠其它细胞因子有交叉反应。
3. 重复性：板内、板见变异系数均小于10％。
注意事项
1. 以上标准孔及待测样品均建议做复孔，每次测定应同时做标准曲线。
2. 洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致精确度误差及OD值错误地升高。
3. 板条开封后剩余板条要再封好，保持板条干燥。
4. 本试剂盒宜置4oC冰箱保存。
5. 本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断！
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