CA 72-4（化学发光法）试剂盒
2011-11-17 来源:本站 点击次数:1103CA 72-4（化学发光法）检测试剂盒
德国DRG原装进口，货号：CLA-4730
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预期用途
此试剂盒是一种用于检测血清和血浆中CA 72-4的化学发光试剂盒，在美国仅用于研究
实验原理
此试剂盒采用的是化学发光免疫法，基于夹心原理
微孔板内包被有能结合CA72-4分子上独特抗原位点的单克隆小鼠抗体，样品中的内源性CA 72-4与HRP标记的抗CA 72-4抗体共同孵育，孵育后洗去未结合的酶联物，样品中的CA72-4的浓度与结合的酶联物量成正比；加入底物后，发光的强度与样品中的CA72-4的浓度成正比。
注意事项及预防措施
1. 试剂仅供专业人士使用
2. 试剂盒中的所有试剂包括检测过的人血清/血浆对HIV/II，HbsAg和HCV都表现为阴性，所有的试剂在使用和处理的过程中都应当作潜在生物有害物质进行处理
3. 开始试验前，请仔细阅读说明书，确定所有的事项都已明白
4. 微孔板是可拆的，不用的板条应固定在板架上，装在密封袋内保存于2-8℃
5. 加样时应按相同的顺序快速加样
6. 不同的试剂装在不同的试剂瓶内，不能混用，如果用事先装了酶联物的瓶子再装底物液，则颜色会发生变化。不要将剩余的试剂倒回原装瓶内，以免污染
7. 充分混匀孔内成分，以达到很好的试验结果。微孔板不可重复使用
8. 试验过程中，不要让孔内出现干燥情况，洗板步骤过后应立即加样
9. 试验开始前，所有试剂平衡至室温，温度会对试验结果有影响
10. 不要用嘴吸取样品，避免皮肤接触到试剂和样品
11. 实验区内禁止饮食
12. 处理试剂和样品时应戴一次性手套。微生物污染可能会导致结果失败
13. 按照相应的国家生物安全管理条理进行操作
14. 不要使用过期的试剂
15. 所有试剂的量都应按说明来，使用校正的移液器和发光仪可得到最佳的结果
16. 发光底物液对光敏感，应避免阳光直射，保存于黑暗处
17. 不要混合使用不同批次的试剂，板条。试剂盒的运输和贮存环境不同可能会导致结果有微小的区别
18. 有些试剂内含有Proclin300，BND和MIT作为防腐剂，万一眼睛或皮肤接触到了应立即用水冲洗
19. 按照相应的国家生物安全管理条理公认的方法处理样品和试剂
20. 有害物质的相关信息请参考MSDS，产品的MSDS可直接向DRG索取
试剂盒组成
1. 微孔板，12x8, 96孔，可拆，包被有抗CA 72-4抗体（单克隆）
2. 标准品，0-4,5支，即用，1.0ml，浓度为：0；3；20；50；100U/ml 含0.03%的Proclin300，BND和0.01%的MIT作防腐剂
3. 质控，1支，0.5ml，冻干粉，质控值和范围请见QC质控单 含0.03%的Proclin300，BND和0.01%的MIT作防腐剂
4. 样品稀释液，1支，3ml，即用，含0.03%的Proclin300作防腐剂
5. 酶联物，10X，1支，1.4ml，HRP标记的抗CA 72-4抗体，含0.03%的Proclin300，BND和0.01%的MIT作防腐剂
6. 酶联物稀释液，1支，14ml，即用，含0.03%的Proclin300，BND和0.01%的MIT作防腐剂
7. 底物液
试剂A，1支，4.0ml，注意：光敏感
试剂B，1支，4.0ml，注意：光敏感
试剂C，1支，8.0ml
8. 洗涤液，1支，30ml，40X
实验所需材料但试剂盒未提供
1. 发光光度计
2. 校正的移液器
3. 吸水纸
4. 去离子水
5. 计时器
6. 半对数坐标纸或数据统计软件
贮存条件
未开封的试剂在2-8℃下可保存至有效期，不要使用过期的试剂
打开的试剂必需保存在2-8℃，微孔板也保存于2-8℃，一旦打开了微孔板的袋子，需小心地将其重新密封
开封的试剂盒如按以上描述的贮存方法可保存6周
试剂准备
实验前将所有试剂平衡至室温
质控
在冻干粉中加0.5ml的去离子水配制质控品，放置10min，使用前反复摇匀
配制的质控品应分装贮存于-20℃
洗涤液
加去离子水稀释40X的浓缩洗涤液
30ml的浓缩洗涤液+1170ml的去离子水，即得1200ml的工作洗涤液
室温下可保存2周
酶联物
以1:10的比例用酶联稀释液稀释
配制的酶联物在密封容器内于2-8℃可保存1周
例如：
如果板条全部使用，吸取1.2ml的浓缩酶联物，加上10.8ml的酶联物稀释液，即得
如果板条不全使用，吸取100ul的浓缩酶联物，加上0.9ml的酶联物稀释液，即得
相关酶联物制备见下表
|
板条数
|
酶联浓缩物
（ul） |
酶联稀释液
（ml） |
|
1 |
100 |
0.9 |
|
2 |
200 |
1.8 |
|
3 |
300 |
2.7 |
|
4 |
400 |
3.6 |
|
5 |
500 |
4.5 |
|
6 |
600 |
5.4 |
|
7 |
700 |
6.3 |
|
8 |
800 |
7.2 |
|
9 |
900 |
8.1 |
|
10 |
1000 |
9.0 |
|
11 |
1100 |
9.9 |
|
12 |
1200 |
10.8 |
化学发光底物液
试剂A和试剂B混合，然后以1:2的稀释比例用试剂C稀释，即得即用的底物液
现配现用，只能保存1小时
如果所有板条都使用，则试剂A和试剂B各3ml混合+6ml的试剂C
样品采集和准备
试验可采用血清和肝素血浆
柠檬酸盐血浆值减小，EDTA血浆值增高
不要使用溶血，黄疸或脂血的样品
样品采集
血清
静脉穿刺采血，允许凝集，室温下离心分离出血清。未完全凝固时不可进行离心。接受了抗凝剂治疗的捐献者的血液凝集时间更长
血浆
将全血收集到含有抗凝剂的离心管内，采集后立即离心
样品贮存和准备
实验前，将样品盖上盖子，贮存于2-8℃，可保存5天，想保存更长时间则需冻存于-20℃，避免反复冻融
样品稀释
在最初的试验中，如果样品浓度高于最高标准品浓度，则应用样品稀释液进行稀释
结果计算时应乘以稀释因子
例如：
A）1:10稀释 10ul血清+90ul样品稀释液（充分混匀）
B）1:100稀释 10ul稀释液A）1:10+90ul样品稀释液（充分混匀）
实验操作
操作注意事项
1. 实验前将所有试剂平衡至室温，混匀，不产生气泡
2. 实验一旦开始，所有步骤必须完整的进行下去
3. 避免污染试剂，枪头和微孔/管。每个微孔的加样都应该用新的枪头，避免交叉污染
4. 实验前将所有试剂准备好，盖子打开，所需板条固定等，这样可以确保每个步骤间隔时间一致，无中断。
5. 酶免反应中时间和温度成线性关系
实验步骤
每次检测都应建立一标准曲线
1. 将实验所需板条固定于板架上
2. 加25ul的标准品，质控品和样品于相应的孔内
3. 每孔加100ul现配的酶联物，充分混匀10秒，充分混匀这一步很重要
4. 室温下孵育60min
5. 弃去孔内废液，每孔400ul的洗涤液洗板5次，吸水纸上拍干
重要提醒：洗板过程直接会影响到实验的灵敏度和精确度
6. 每孔加100ul现配的底物液
7. 室温下孵育10min
8. 加入底物液20min内在发光光度计上读数
结果计算
1. 计算各标准品，质控品和样品的RLU平均值
2. 在半对数坐标纸上，以标准品的RLU的均值为Y轴，浓度为X轴绘制标准曲线
3. 从标准曲线上通过RLU均值找到相对应的浓度值
4. 全自动法：自动法用最合适的4参数对数拟合法计算，它是首选计算方法，其他方法得出的结果可能会有细微的区别
5. 样品浓度可直接从标准曲线上读取，样品浓度高于最高标准品浓度的则需进一步稀释，或记录为＞100U/ml。结果计算时要乘以稀释因子
使用局限性
试验中严格按照说明书操作和良好的实验操作习惯可得到最优试验结果
任何不恰当的处理或试验步骤的改动都会对结果造成影响
干扰底物
以下物质低于下面所述浓度，其实验结果都会不明显
|
血红蛋白 |
4mg/ml |
|
胆红素 |
0.5mg/ml |
|
甘油三酯 |
7.5mg/ml |
药物干扰
目前为止还没有一种药物对CA 72-4检测会产生影响
本译文仅供参考，详情请以原文为准
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