S100B蛋白ELISA试剂盒使用说明
2011-11-17 来源:本站 点击次数:1812S100B蛋白ELISA试剂盒
德国DRG原装进口，货号：EIA5169
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预期用途
此试剂盒用于人血清和血浆中S100B浓度的检测，仅用于实验室
实验原理
此试剂盒基于两抗体与S100B结合，一个抗体固定在包被板上，另外一个则被HRP标记。试验基于两步法，每次洗板后，结合的和游离的就会分离，底物液TMB加入，会发生颜色变化，终止液加入终止反应，吸收值检测。样品中的S100B的浓度计算可从标准品着手。颜色强度与样品中的S100B的浓度成正比
试剂盒组成
1. S100B标准品，6支，冻干粉，STD0-STD5
2. 质控品，2支，冻干粉，阴性质控和阳性质控
3. 酶联物缓冲液，1支，20ml，Tris缓冲液，BSA10g/L,0.05%吐温
4. 酶联物，1支，1ml，HRP标记的抗S100B
5. 试验缓冲液，1支，12ml，Tris缓冲液，BSA10g/L，稳定剂
6. 包被板，可拆，包被有抗S100B
7. TMB底物液，1支，15ml，H2O2-TMB 0.25g/L，避免皮肤接触
8. 终止液，1支，15ml，0.15mol/L硫酸，避免皮肤接触
9. 洗涤浓缩液，50X，1支，20ml，NaCl 45g/L,吐温20 55g/L
实验所需但试剂盒未提供
1. 去离子水
2. 自动移液器
3. 酶标仪
注意：所有试剂应保存在黑暗处2-8℃，微孔板平衡至室温方可打开包装，使用完后立即密封，不要移去未用板条的粘合条
注意事项
1. 试剂内含有硫柳汞防腐剂
2. 配制和吸取试剂时应按最高精确度要求操作
3. 所有试剂都有各自的批号，不要混用不同批次内的物质
4. S100B的检测范围为10-5000pg/ml
5. 标准品的具体浓度见瓶上标签
6. 不要使用严重溶血样品
7. 避免底物液暴露在阳光，金属或氧化剂下
操作步骤
样品准备
S100B检测可使用人血清或血浆，不要使用溶血样品，样品可在2-8℃下保存1天，更长的保质期的话可放置在-20℃，避免反复冻融，不要将样品放置在室温下的时间过长，样品浓度高于5ng/ml时，应用试验缓冲液进一步稀释
标准品和质控品的准备
用1ml的去离子水配制标准品和质控品，可保存于2-8℃下4周，-20℃6个月，建议分装保存于-20℃。标准品浓度见标签。避免反复冻融和长时间暴露在室温下
酶联物的准备
使用前2小时准备
50ul的酶联物+1.0ml的酶联缓冲液（稀释的酶联物的量与试验样本量成正比），混合5min，避免气泡产生，室温下（22-28℃）可保存3小时
洗涤液准备
10ml的洗涤浓缩液+490ml的去离子水；不同的体积但保持同一稀释比例；室温下（22-28℃）可保存至标签上所示的有效期
实验步骤
建议做双份检测，包括标准品，质控品和样品，还有一个空白对照孔
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试剂 |
标准品 |
样品/质控 |
空白对照 |
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标准品S0-S5
质控 |
50ul |
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样品/质控 |
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50ul |
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试验缓冲液 |
50ul |
50ul |
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室温下孵育2小时，弃去孵育液，每孔加300ul的洗涤液洗板6次 | |||
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稀释的酶联物 |
100ul |
100ul |
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室温下孵育1小时，弃去孵育液，每孔加300ul的洗涤液洗板6次 | |||
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TMB底物液 |
100ul |
100ul |
100ul |
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黑暗处，室温下孵育30min | |||
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终止液 |
100ul |
100ul |
100ul |
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轻轻摇动微孔板，酶标仪上读数（450nm） | |||
结果计算
1. 计算每一标准品和样品的平均OD值
2. 以标准品吸收值和浓度绘制一最合适的标准曲线（三次回归或四参数）
3. 从标准曲线上可直接读取样品浓度
附：采用全自动酶标仪检测，只需检测前设置好酶标仪的相关参数，如坐标参数（线性，半对数）和计算方式参数（三次回归、四参数或双对数曲线方程），即可直接得到结果
本译文仅供参考，详情请以原文为准。
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