NF-κB(p65)/ NF-κB(p50)活性分析试剂盒原理及应用介绍
2016-03-16 来源:本站 点击次数:7673NF-κB/Rel转录因子家族包含几种结构相关的蛋白（p65/p105,p52/p100,RelA(p65),c-Rel/ NF-κB)形成同源和/或异源二聚体。该转录因子家族成员调控超过150种目的基因，包括炎症细胞因子、趋化因子、免疫受体、细胞粘附分子等的表达。正因为如此，NF-κB被认为是“免疫应答的中心调节物”。作为二聚体，这些转录因子与DNA序列结合（这些结合位点被称为“κB位点”），从而调节目的基因的表达。在大多数细胞中，NF-κB/Rel转录复合物以未活化的形式存在于胞浆中，与抑制剂IκB结合。当细胞受到刺激后，一些列的磷酸化、泛素化反应导致IκB降解，NF-κB转录因子进入细胞核。
由于NF-κB转录因子在人类炎症反应和其他疾病中的重要作用，吸引了越来越多研究者的目光，而细胞中NF-κB各亚基活性的检测是NF-κB研究中必不可少的一步！
怎样安全、方便、有效的检测细胞中NF-κB各亚基活性呢？
艾美捷给出了答案：NF-κB (p65) Transcription Factor Assay Kit（货号：10007889）及NF-κB (human p50) Transcription Factor Assay Kit（货号：10006912）。在前期的样本处理中，还可以使用细胞核提取试剂盒（Nuclear Extraction Kit，货号：10009277）。
微孔板预先包被含有NF-κB结合位点的dsDNA寡核苷酸，加入细胞核提取物，使NF-κB蛋白结合到dsDNA上，洗涤除去未结合组分，先后加入NF-κB特异性抗体和HRP标记的二抗。加入酶底物后，通过酶促反应，读取OD450值来定量样本中NF-κB的活性。
图2：NF-κB（p65）/ NF-κB（p50）转录因子分析试剂盒原理展示
●取代了传统的凝胶迁移或电泳迁移率实验（EMSA），基于ELISA反应原理可实现大量样本的快速高通量检测
●在DNA与蛋白质相互作用的水平检测NF-κB活性，能够检测出细胞内真正处于活化状态的NF-κB
●试剂盒中分别含有NF-κB（p65）/ NF-κB（p50）转录因子阳性对照
●NF-κB（p65）转录因子分析试剂盒可检测人、小鼠及大鼠的NF-κB（p65），不与NF-κB（p50）发生交叉反应；NF-κB（p50）转录因子分析试剂盒可检测人NF-κB（p50），不与NF-κB（p65）发生交叉反应
图3：NF-κB（p50）/ NF-κB（p65）转录因子分析试剂盒结果展示
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