细胞周期碘化丙啶红色荧光流式细胞分析试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

YIJI细胞周期碘化丙啶（PROPIDIUM IODIDE）红色荧光流式细胞分析试剂是一种旨在通过细胞流式仪测定细胞中DNA结合碘化丙啶染料程度，来定量DNA含量，以进一步获取细胞周期分布状况的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种细胞（动物、人体、植物、昆虫等）的细胞周期分析。可以被用于细胞凋亡、信号传递、细胞分裂、代谢等的研究。产品严格无菌，即到即用，分辨率高，操作简捷，性能稳定。

技术背景

细胞周期是评价细胞代谢、生理和病理状况的重要指标。通过DNA结合染料，借助细胞流式仪，测定出DNA含量，根据DNA含量随着细胞周期的不同而发生变化，来确定和区别细胞周期的不同阶段。流式细胞术（FLOW CYTOMETRY）是七十年代发展起来的集计算机、激光、流体力学、细胞化学、细胞免疫学为一体的高科学技术。凋亡细胞是在正常G0/G1峰细胞群前出现亚二倍体峰（sub-G1）细胞群。

产品内容

YIJI清理液（Reagent A）     100毫升

YIJI固着液（Reagent B）     100毫升

YIJI缓冲液（Reagent C）      50毫升

YIJI染色液（Reagent D）    2毫升

产品说明书  1份

保存方法

保存YIJI缓冲液（Reagent C）和YIJI染色液（Reagent D）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；YIJI染色液（Reagent D）避免光照，有效保证6月

用户自备

HANKS平衡盐溶液（GMS12022）或PBS缓冲溶液（GMS12033）：用于清洗细胞

胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（GMS12024）：用于细胞脱离

完全细胞培养液（GMS12052）：用于中和胰蛋白酶的处理

15毫升锥形离心管：用于细胞收集的操作

1.5毫升离心管：用于细胞染色的容器

（微型）台式离心机：用于细胞收集的操作

细胞流式仪：用于细胞荧光分析

实验步骤

实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的试剂置入冰槽里融化。移出500微升YIJI缓冲液（Reagent C）到新的1.5毫升离心管，加入20微升YIJI染色液（Reagent D）混匀后标记为YIJI染色工作液，置于暗室里，避免光照。然后进行下列操作。

• 准备1瓶25cm²细胞培养瓶的待测细胞，铺满率达70％（约1百万细胞数）
• 小心移出细胞培养液到15毫升锥形离心管（收集漂浮细胞）
• 加入2.5毫升用户自备的HANKS平衡盐溶液或PBS缓冲溶液到细胞培养瓶，覆盖培养瓶表面
• 小心移出2.5毫升清洗液到上述15毫升锥形离心管
• 加入1毫升胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液到细胞培养瓶，铺满整个培养平面
• 置入37℃培养箱孵育1分种
• 振动培养瓶，使细胞脱落，然后加入5毫升用户自备的完全细胞培养液
• 移入到上述15毫升锥形离心管（悬浮细胞从这一步骤开始）
• 放进台式离心机离心5分钟，速度为300g
• 小心抽去上清液
• 加入1毫升预冷的YIJI清理液（Reagent A）到15毫升锥形离心管，混匀
• 移入到1.5毫升离心管
• 放进4℃微型台式离心机离心5分钟，速度为500g（或2000RPM，例如EPPENDORF 5415）
• 小心抽去上清液
• 加入1毫升预冷的YIJI固着液（Reagent B），混匀
• 放进4℃冰箱里孵育16小时
• 放进4℃微型台式离心机离心5分钟，速度为500g（或2000RPM，例如EPPENDORF 5415）
• 小心抽去固着液
• 加入500微升YIJI染色工作液，用200微升枪头上下轻柔抽吸，混匀细胞颗粒群
• 在暗室里37℃培养箱里孵育45分钟
• 移入到细胞流式仪专用测试管（可放进4℃冰箱里待测）
• 即刻进行细胞流式仪分析：波长488nm氩离子激光出现红色荧光（或488nm激发波长，610nm散发波长），观察50000个细胞以上

注意事项

• 本产品为100次操作
• 确保实验准确性，须收集所有悬浮和贴壁细胞
• 可用35mm培养皿或6孔培养板，细胞总量不得少于30万
• 操作时，须戴手套
• 孵育时，必须避免光照
• 建议细胞染色完成后，即刻进行细胞流式仪分析。如果放进4℃冰箱里待测，不要超过1周
• 细胞流式仪分析前，须混匀内容物，避免细胞成团
• 细胞检测量不得少于10000个
• 告知流式仪技术员有关细胞类型
• 本公司提供系列细胞周期分析试剂产品

质量标准

• 本产品经鉴定性能稳定
• 本产品经鉴定荧光清晰