鱼雌激素受体ELISA试剂盒操作方法技术检测范围
2019-03-25 来源:www.shrjbio.com 点击次数:2858
鱼雌激素受体ELISA试剂盒操作方法技术检测范围
操作步骤
备注：
1. 标准品浓度依次为：400、200、100、50、25、12.5 pg/mL
2. 经过大量正常标本检验，标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内，实验过程中直接取50μL样本上样即可。当有部分样本值超过最大标准品浓度时，可用样本稀释液将标本进行适当稀释后再进行实验。
注意事项
操作步骤
- 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
- 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
- 样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。
- 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
- 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
- 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
- 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
- 检测范围：12.5 pg/mL – 400 pg/mL。
- 灵敏度：最低检测浓度小于1.0 pg/mL。
- 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
- 重复性：板内变异系数小于10% ，板间变异系数小于15% 。
| 名称 | 96孔配置 | 48孔配置 | 备注 |
| 微孔酶标板 | 8孔×12条 | 8孔×6条 | 无 |
| 标准品 | 0.3mL*6管 | 0.3mL*6管 | 无 |
| 样本稀释液 | 6mL | 3mL | 无 |
| 检测抗体-HRP | 10mL | 5mL | 无 |
| 20×洗涤缓冲液 | 25mL | 15mL | 按说明书进行稀释 |
| 底物A | 6mL | 3mL | 无 |
| 底物B | 6mL | 3mL | 无 |
| 终止液 | 6mL | 3mL | 无 |
| 封板膜 | 2张 | 2张 | 无 |
| 说明书 | 1份 | 1份 | 无 |
| 自封袋 | 1个 | 1个 | 无 |
1. 标准品浓度依次为：400、200、100、50、25、12.5 pg/mL
2. 经过大量正常标本检验，标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内，实验过程中直接取50μL样本上样即可。当有部分样本值超过最大标准品浓度时，可用样本稀释液将标本进行适当稀释后再进行实验。
注意事项
- 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。
- 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。
- 消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。
- 底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。
- 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。
- 在储存和温育时避免强光直接照射。
- 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。
- 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。
- 不能使用过期产品。
- 如果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。
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