mRNA原位杂交试剂盒说明书
2019-06-24 来源:本站 点击次数:569
mRNA原位杂交试剂盒
原位杂交成套试剂盒，由于采用高效标记的探针和敏感性加强型原位杂交检测试剂盒；使得原位杂交实验的成功率大大提高，操作也更简便。但仍有一些问题是引起注意的；
1、有条件应尽可能用新鲜标本，并及时进行固定。固定液为4%多聚甲醛(0.1MPBS，PH7.0-7.6)含0.1%DEPC。因为mRNA类基因容易降解。
2、标本的消化对原位杂交比较重要，适当的消化将使靶基因充分暴露，增加探针的接触性。但过度的消化将使标本明显减薄乃至消失。不同的标本对消化的敏感性不同。常用的消化酶有蛋白酶K和胃蛋白酶。大量标本实验前，应仔细摸索最佳的消化条件。蛋白酶K的消化条件为10ug/mL(0.1M TBS,PH7.2-7.6)，37℃消化1-5分钟。
3、杂交后的洗涤对信号/背景/强度有密切关系，洗涤时间越短，信号越强，背景也越高；洗涤时间超长，信号越低。适当的洗涤时间会获得理想的信号强度和可以忽略的背景染色。mRNA原位杂交试剂盒
原位杂交成套试剂盒，由于采用高效标记的探针和敏感性加强型原位杂交检测试剂盒；使得原位杂交实验的成功率大大提高，操作也更简便。但仍有一些问题是引起注意的；
1、有条件应尽可能用新鲜标本，并及时进行固定。固定液为4%多聚甲醛(0.1MPBS，PH7.0-7.6)含0.1%DEPC。因为mRNA类基因容易降解。
2、标本的消化对原位杂交比较重要，适当的消化将使靶基因充分暴露，增加探针的接触性。但过度的消化将使标本明显减薄乃至消失。不同的标本对消化的敏感性不同。常用的消化酶有蛋白酶K和胃蛋白酶。大量标本实验前，应仔细摸索最佳的消化条件。蛋白酶K的消化条件为10ug/mL(0.1M TBS,PH7.2-7.6)，37℃消化1-5分钟。
3、杂交后的洗涤对信号/背景/强度有密切关系，洗涤时间越短，信号越强，背景也越高；洗涤时间超长，信号越低。适当的洗涤时间会获得理想的信号强度和可以忽略的背景染色。mRNA原位杂交试剂盒
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