临近开学，
我司技术支持
（兼心理辅导师）
还会经常收到这样焦虑的问题：
“ 老si，你好，
如何才能收获一盘漂亮的细胞呢？
为啥别人家的细胞养得那么好呢，
我的就一言难尽呢”

养出漂亮细胞 这个事儿本就说来话长~
前几期话题，我们给大家讲过
细胞贴壁、老化、成团、
冻存、复苏、污染等问题 。
这次小编又整理了一遍，
先看看这些基本点是否都做好了
 

绝对的无菌意识
1. 细胞刚拿到手最好先做一下支原体检测，发现有污染迅速处理掉。
2. 严格无菌操作，BI也提供Pharmacidal喷壶，有效预防真菌（和孢子），细菌（和孢子），支原体和病毒 (包括HIV和Hepatitis B) 的生长和污染。
3. 真的不要和别人共用试剂耗材，自己准备一套！
4. 水浴锅很脏，可用BI Aquaguard-1 消毒水盘，效果非常好。
5. 最好是同一时间只有一个人在细胞房养细胞。

用好培养基和血清
1. 养细胞之前，就要先了解细胞的来源、种类、名称，查阅一定量的文献，确定所需培养基种类及是否需要添加特殊成分。
2. 血清主要功能是补充细胞生长因子，提供细胞生长所需的蛋白质、脂肪、糖类、不同细胞对生长因子的要求也不一样。血清替代物取代血清补充生长因子和蛋白质，但不一定是最适合细胞的，因此使用时要注意，避免引起细胞分化或老化。
3. 这里我们顺便说一下常见的血清沉淀：血清沉淀是血清纤维的凝集，不影响细胞生长，不必惊慌！我们建议2000rpm离心5min取上清即可，并不影响血清质量。
4. 如果细胞活力差，可增加血清浓度到20%， 给细胞较多的生长因子，等细胞长起来再降回原来的浓度。
 

了解细胞生长习性 
不同的细胞生长习性不同，了解细胞生长习性，正确计数，才能掌握好传代密度。对于一般细胞株，控制在三天一传，是比较合适的，细胞不会太挤也不会太寂寞。但例如癌细胞，一发起疯来半天就可以传代，不及时换液或扩增分分钟会饿死或挤死。
所以刚开始接触一款细胞，要勤观察，及时掌握它的生长情况。掌握细胞的生长节奏之后可以变成一天一看或两天三看，毕竟太频繁的把它从培养箱里拿出来也不太好。
 

胰酶消化程度是要害
消化一定程度上是对细胞的一种折磨，在使用胰酶（Trypsins）细胞消化液的过程中要特别注意避免消化液被细菌污染。胰酶细胞消化液消化细胞时间不宜过长，否则细胞铺板后生长状况会较差，做流式时的CD Marker 也可能会下降。

对大部分细胞消化来说，可以在消化到差不多快要脱落的时候，移除大部分胰酶，然后直接加新鲜的培养基将细胞吹打下来，省去离心步骤。残余的胰酶含量很低，所以不会对细胞产生任何影响。
对于难消化的细胞，如HCT15, LS411和KM12，用不含Ca²⁺、Mg²⁺的PBS洗涤一次后，加入稍微多一点胰酶，置37ºC彻底消化(一般为几分钟)至脱落（一晃细胞就掉下来），然后再加含血清的培养基终止胰酶反应、离心 (若是无血清培养基，需改加胰酶抑制剂)。这么做的道理是，细胞消化不彻底，势必会增加吹打辅助脱落的次数，而吹打次数越多，细胞活性越差。
 

培养瓶的选择
一般，生长速度慢的细胞如果想要更漂亮的细胞状态，那么采用塑料瓶会比玻璃瓶的效果好；生长速度快的细胞，用玻璃瓶培养的效果会更好。因此，对于同一种细胞，在其生长速度慢的时候（比如细胞刚复苏时或者原代培养），塑料瓶会好一点；而在其生长旺盛的时候，玻璃瓶则相对会好一点。
 

细胞娇弱，想要成功地养好细胞，需要时刻惦记它，及时观察，出现意外，及时处理，才能收获一盘漂亮的细胞。若仍有疑问，建议回顾往期文章或联系我们

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