羊水细胞培养和染色体制备，
是染色体病产前诊断的主要手段，
But
羊水中活细胞数少，
且羊水细胞培养技术要求高、
培养时间长、易污染、
所以羊水细胞培养成功率一直很低
培养成功了，
也会遇到分裂相较少，
形态不佳的问题。

不断改进的培养技术
和质量有保证的培养基
对羊水细胞培养至关重要
那 么
。
。
。

离心后吸去上清液

留下的细胞沉淀

6.  用1ml BioAMF-2 重新悬浮细胞块

1ml BI羊水培养基重新悬浮细胞

7.  取35mm培养皿，在盖子上面及下半部侧壁都做好标记（包括编号，姓名等）。为便于移动和观察，将两个小培养皿放入一个90mm培养皿中操作。

8.  滴加0.5ml细胞悬液至每块盖玻片中央，用移液管尖小心摊开（注意避免流出盖玻片外）。

接种细胞

将细胞悬液摊匀在盖玻片上

轻轻放入培养箱

9.  24小时之后，给每块盖玻片补加1.1ml BioAMF-2。
10.  当克隆大小、数量合适并显示有丝分裂迹象时收获细胞（培养7天后）。

滴加秋水仙素

2.  从培养箱中拿出培养皿至通风橱，自此实验期间避免移动培养皿。

3.  吸弃或倾倒掉培养液（正常情况下不必担心盖玻片掉出），用吸头沿培养皿内壁缓慢加入2ml 0.48M KCl（39℃预热）至盖玻片上（避免吸头直接接触到玻片，2ml在培养皿内壁相对两个地方分两次加入）。

倾倒培养基等  

沿培养皿内壁加入KCl等

4.  培养皿加盖，室温（25℃左右）下孵育30min。

5.  沿培养皿内壁缓慢加入加1ml新鲜、预冷的固定液（75%甲醇：25%乙酸）至培养皿中，加盖，室温下放置10min。（每天早上配制，4℃冰箱预冷，使用过程中随时放回冰箱）

6.  吸掉或倾倒液体，缓慢加入2ml新鲜、预冷的固定剂，加盖，室温下放置30min。

7.  吸掉或倾倒固定剂，加入2ml新鲜、预冷的固定剂。加盖，室温（25℃左右）下放置10min。

8.  吸去或倾倒固定剂，放于干燥室或化学通风橱，保持室内湿度50%-60%，可以通过加湿器控制环境湿度。

9.  此时需要标记好载玻片以便染色，载玻片必须和培养皿相对应；

标记好载玻片

10.  轻轻挤压培养皿，用针从培养皿中沿边缘轻轻挑取盖玻片，放在干净吸水纸上静置5~10min，干燥后加封片胶DPX贴于载玻片上（细胞面朝上）。注意避免盖玻片刮擦或折断等损坏。

轻轻挤压培养皿，用针挑起盖玻片

将盖玻片放在吸水纸上晾干

将盖玻片胶粘在载玻片上

11.  室温下静置2小时，直到DPX完全干燥。
12.  60℃烘箱中烘烤过夜。
13.  按要求进行染色体。

以色列BI生产的BIOAMF（医疗器械备案号：沪浦械备20150067号）
专门针对胎儿染色体核型分析的羊水和绒毛细胞原位培养而研发，
BIOAMF用于封闭和开放环境培养，解冻即可用，完全培养基。

缓冲效果更佳，
适用于封闭和开放培养系统，
增加细胞分裂中期产量，
有丝分裂中期染色形态更佳，条带清晰。

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