基于病毒的生物制品生产中的切向流过滤应用

来自加拿大麦吉尔大学等的科学家们在2019年第37的《Vaccine》杂志上发表了题为“Production of rVSV-ZEBOV in serum-free suspension culture of HEK293SF cells”的文章。文中，研究人员指出埃博拉病毒疾病目前仍是一种为国际社会关切的重点疾病，已有多篇文章报导了数种疫苗首选物在非人体灵长类动物研究以及临床试验中的积极结果，而其中最有前景的是rVSV-ZEBOV疫苗（基于重组水泡口炎病毒的埃博拉病毒Zaire株疫苗）。在此研究中，研究人员尝试使用悬浮的HEK 293SF细胞和无血清培养基生产rVSV-ZEBOV，其目的是使用HEK 293SF生产平台，建议工艺，优化生产滴度，证实生产的可放大性以及所获得物料在动物模型中诱导免疫反应的有效性。

文中，生产和纯化用于动物研究的rVSV-ZEBOV物料时，以2L摇瓶培养HEK 293SF细胞，工作体积600mL，培养至细胞密度1.88 x 10^6cells/mL，以MOI 0.01感染，感染后48小时收获培养液，加入10 U/mL Benzonase孵育，消解DNA和RNA。离心收获含有rVSV-ZEBOV的上清液，使用63mm玻璃纤维预过滤器和0.45μm过滤器两步过滤。滤液使用配有MWCO 750 kD 中空纤维组件的KrosFlo® Research 2i 切向流过滤系统浓缩40倍，浓缩的病毒再以碘克沙醇密度梯度离心纯化，并以由10mM Tris组成并补充4%蔗糖的注射缓冲液洗滤7体积。样品进一步浓缩至3.5mL，然后加入人血清白蛋白至终浓度2.5 g/L，以确保冻存时，注射缓冲液中的纯化病毒的稳定性。

原文：J.Gelinas, H.Azizi, S.Kiesslich, et al., Production of rVSV-ZEBOV in serum-free suspension culture of HEK 293SF cells. Vaccine, 2019, 37: 6624-6632.

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