前情回顾：食品真菌毒素检测的那些事

       

       Elisa生物检测是一种敏感度高，同时特异性强，重复性好的实验检测方法，由于其试剂稳定、易保存，操作简便，结果判断较客观等因素，已广泛应用在免疫学检验的各领域中。

 

       目前市面上的Elisa试剂盒检测原理主要有以下四种：直接法，间接法，夹心法，竞争法。

 

 

       四种Elisa检测方法由于其检测原理各有优劣：

 

	优点	缺点
直接法	1.操作简便 2.消除了二抗交叉反应	1.一抗由于添加标签免疫活性降低 2.标记一抗耗时且昂贵 3.没有产生信号放大
间接法	1. 一抗的最大免疫反应性得以保留 2. 高灵敏度，信号放大	1. 二级抗体可能发生交叉反应，产生非特异性信号 2. 需要额外的孵育步骤
夹心法	1.特异性，灵敏度高 2.适合复杂的样本	1.检测时间，反应时间增加 2.步骤繁琐
竞争法	1. 通过观察预期信号输出中的干扰来测量样本中抗原（或抗体）的浓度。 2. 最常用于分析物较小，不能同时跟两种不同的抗体结合。	1.计算不太直观 2.总体敏感性和特异性较低。

 

       通常我们在购买我们所需要的Elisa试剂盒时主要会从以下几个方面进行选择：

 

       Elisa试剂盒选择原则：

 

指标	选项
样本类型	人，小鼠，大鼠
检测指标的类别	•多表位的大蛋白：夹心ELISA •小分子：竞争ELISA
检测需求	定性或定量
灵敏度	低浓度的物质需选择高灵敏度检测方式
样本体积	珍贵的样本用少量的体积
回收率和线性	•灵敏度 •动态范围 •标准曲线
检测系统	比色法，荧光法，发光法
其他优势	协议简单，操作方便，实验时间短

 

       我们购买的Elisa试剂盒质量到底怎样？检测结果的可信度高不高？

 

       Elisa试剂盒评价标准：

 

       ① 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，应大于等于0.9900。

 

       ② 灵敏度：反应试剂盒的最低检测浓度

 

       ③ 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

 

       ④ 重复性：板内、板间变异系数

 

       ⑤ 回收率：判断实验的准确性和特异性

 

       Elisa试剂盒的标准曲线：

 

       标曲R值是几个9才合格？

 

       实验室应按检测标准（方法）的要求使用标准溶液或标准物质建立标准曲线。所用标准溶液或标准物质应覆盖被测样品的浓度范围。检测标准（方法）如无具体的要求，至少使用5个标样（除空白外）建立线性标准曲线，每个点重复测定1-3次，对于筛选方法，线性回归方程的相关系数不应低于0.98，对于确证方法，相关系数不应低于0.99。

 

       其实，大于0.99是判断是否为线性相关的一个标准，实际应用中线性大于0.999才是比较理想的。线性在0.99到0.999之间的监测结果只用接近最高浓度一半（中间浓度）的位置才比较准确，如果线性大于0.999的话，在整个线性范围内都会有一个比较满意的结果。

 

       如果检测的线性不好，可以减少标准的覆盖范围，将标准的浓度调整到待测样品浓度附近，这样结果也是非常准确的。例如，样品的浓度约20ppb,但在0~50ppb范围建立标准曲线，但线性非常不理想，这时可以将标准范围调整到15~25ppb之间，作五个标准。

 

       在这里，我们给大家带来美国著名的生物检测工具供应商Biovision开发了一系列的我们准确性高，灵敏度高，特异性好，重复性好，可以检测检测各类食品，饲料，组织及生物液体中真菌毒素、抗生素、食品添加剂以及其他细菌蛋白的ELISA试剂盒：

       1.抗生素类：

 

       检测食品中抗生素的残留

       样本类型：组织、血清、牛奶、鸡蛋和其他生物样本

 

指标	货号	灵敏度	样本
氨苄青霉素	E4350	2.5 ng/ml	血清，尿液，牛奶，组织
氯霉素	K4230	0.025 ng/ml	组织，牛奶，蜂蜜，记蛋
庆大霉素（血清/尿液）	K4315	0.3 ng/ml	血清，尿液，牛奶，组织
庆大霉素	K4206	0.3 ng/ml	牛奶，组织
异烟肼	K4765	0.1μg/ml	血清
卡那霉素	K4210	0.5 ng/ml	组织，牛奶，奶粉
喹诺酮	E4530	0.12 ng/ml	血清，尿液，牛奶
链霉素	E4272	0.1 ng/ml	组织，蜂蜜，牛奶，奶粉
四环素	E4273	0.05 ng/ml	组织，蜂蜜，鸡蛋
万古霉素	E4605	12.8 ng/ml	血清，尿液

 

 

以 庆大霉素 (serum/urine) ELISA Kit（K4315）为例

 

       2.真菌毒素：

 

       真菌毒素是真菌产生的低分子量次级代谢产物

       样品类型：玉米、谷物、花生、大米、大豆等。

 

指标	货号	灵敏度	样本
赭曲霉毒素A（OTA）	E4746	0.1 ppb	饲料、谷物
总黄曲霉毒素	E4747	0.02 ppb	酒、酱油、醋、谷物、花生、 配方饲料、食用油
T-2毒素	E4748	0.05 ppb	玉米、大米、豆类、花生、燕麦、饲料
伏马菌素B1	E4749	0.5 ppb	谷物、花生、饲料
脱氧雪腐镰刀菌烯醇	E4750	3 ppb	大米、小米、面粉和其他作物/饲料
黄曲霉毒素M1	E4566	0.02 ppb	牛奶、奶粉
黄曲霉毒素B1（AFB1）	K4208	0.05 ppb	食用油、大米、花生、玉米
玉米赤霉烯酮（ZEN）	E4276	0.3 ppb	谷类及复合饲料

       3.食品添加剂：

 

       食品受到生物和环境污染物的污染发生在生产和加工的几个阶段

       样品类型：牛奶、肉类、玉米、谷物、花生、大米、大豆，等。

 

指标	货号	灵敏度	样本
沙丁胺醇	K4209	0.1 ppb	猪尿、组织、饲料
磺胺单甲氧嘧啶	E4774	0.05 ppb	组织、血清、尿液、蜂蜜、牛奶
磺胺甲氧基二嗪	E4775	0.5 ppb	组织，血清，尿液，蜂蜜，牛奶
呋喃妥因（AHD）	E4275	0.05 ppb	奶粉，牛奶，纸巾，鸡蛋，肝脏，蜂蜜，鱼，虾
磺胺喹恶啉	E4773	0.05 ppb	组织，血清，尿液，蜂蜜，牛奶，饲料

       4.宿主细胞蛋白：

 

       表达蛋白经过几个纯化步骤后，宿主细胞蛋白仍然可以以较高浓度存在，甚至会与原料药一起纯化和浓缩

 

       样品类型：细胞裂解液、其他生物液

 

 

 

QuickDetectTM BSA ELISA Kit（E4466）

       5.其他毒素：

       双酚A和三聚氰胺

指标	货号	检测范围	样本
双酚A（BPA）	E4722	0.4-30 ppb	细胞裂解液，其他生物液体
三聚氰胺	E4274	2-162 ppb	奶粉、牛奶、纸巾、饲料、鸡蛋、血清

 

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