体外共培养模型说明：

(A) Transwell 插入式细胞培养小室被倒置并涂上凝胶，将 HCASMC 接种到底部。
(B) 孵育过夜后，将小室恢复到6孔板中过夜。
(C) 小室的顶部涂有明胶，接种 HCAEC 并孵育过夜。
(D) 在血清减少的培养基中进一步孵育过夜后，将细胞暴露于1.24 Pa的 FSS。

实验结果

首先，将内皮/平滑肌共培养物暴露于1.24 Pa 的 FSS 2h，分别在暴露0h、4h 和 10h 后立即采集样本，测定实验处理后模型中 HO-1 的相对 mRNA 水平。在内皮细胞中，暴露于剪切应力后立即显著增加 HO-1 mRNA水平（静态对照的 1.40 ± 0.08 倍），且在暴露 4h 后仍明显增加（静态的 1.54 ± 0.18 倍）。暴露 10h 后，HO-1 mRNA 与对照无显著差异。
 

在平滑肌细胞中，HO-1 mRNA 在暴露于剪切应力后 4h 后显著增加（静态的 1.29 ± 0.11 倍），并在暴露10h 后保持升高（静态的 1.41 ± 0.13 倍）。
 

之前报道过，FSS 在共培养模型和灌注血管中都增加了 PLGF 表达。为了确定 HO-1 在 FSS 诱导的 PLGF 表达中的作用，采用锌原卟啉 IX (ZPP) 抑制HO-1。ZPP (30 µM) 阻断了 FSS 对 PLGF 的影响，甚至将 PLGF 蛋白降低到低于静态对照水平。同样，在灌注血管中，ZPP (30µM) 阻止了血流增加对 PLGF mRNA 的影响。
 

HO-1 活性导致产生一氧化碳(CO)，游离铁和胆绿素。接下来测试了这些分子中是否有一个或多个可以在血管细胞共培养中上调 PLGF 的表达。经 100µM 胆绿素 (也是 HO-1 的负反馈抑制剂) 处理 24h 后，PLGF 蛋白显著降低。
 

为了确定 CO 是否调节 PLGF 表达，用 CO 释放分子（CORM-A1，0-400 µM）处理共培养物 24h，CORM-A1 显著降低了在 200 µM 和 400 µM下的 PLGF 分泌。
 

实验结论

总之，该研究证明了关键的动脉生成因子 PLGF 在响应 FSS 的生理刺激时受到 HO-1 的调控，这被认为是冠状循环中侧枝发育的重要信号。这项研究建立在对 HO-1 及其代谢物在血管重塑的基础上，揭示了 HO-1 发挥动脉生成作用的一种新的可能机制。