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小鼠载脂蛋白ELISA试剂盒的处理保存方法及标本要求

2022-11-01     来源:本站     点击次数:222

一、小鼠载脂蛋白ELISA试剂盒具有如下优点:
1、高效、灵敏、特异的抗体;
2、稳定的重复性和可靠性;
3、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相载体;
4、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型;
5、性价比非常好,节省实验经费。

二、小鼠载脂蛋白ELISA试剂盒的处理保存方法:
1、血清标本如是以无菌操作别离,则能够在2~8℃下保存一周,如为有菌操作,则主张冰冻保存。样本的长时间保存,应在-70℃以下。
2、标本在保存中如呈现细菌污染所形成的的混浊或絮状物时,应离心沉淀后取上清检测。
3、要注意防止呈现严重溶血。血红蛋白中含有血红素基团,其有相似过氧化物的活性,因此,在以HRP为符号酶的ELISA测定中,如血清标本中血红蛋白浓度较高,则其就很容易在温育过程中吸附于固相,然后与后面加入的HRP底物反响显色。
4、冰冻保存的血清标本须注意防止因停电等形成的重复冻融。标本的重复冻融所发生的机械剪切力将对标本中的蛋白等分子发生破坏效果,然后引起假阴性结果。此外,冻融标本的混匀亦应注意,不要进行剧烈振动,重复倒置混匀即可。
5、样本的采集及血清别离中要注意尽量防止细菌污染,
一则细菌的成长,其所分泌的一些酶可能会对抗原抗体等蛋白发生分化效果;
二则一些细菌的内源性酶如大肠杆菌的β-半乳糖苷酶本身会对用相应酶作符号的测定办法发生非特异性干扰。

三、小鼠载脂蛋白ELISA试剂盒标本要求:
1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。


 
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