核酸提取解决方案具体实验步骤
2022-12-07 来源:本站 点击次数:2291核酸提取
核酸提取是指将核酸（DNA和RNA）从细胞中提取出来的过程，基本包括细胞裂解（Lysis）、杂质与产物分离（Precipitation）、清洗产物（Wash）及产物重悬（Resuspension）的过程。
提取的效果与产物质量控制可以通过后续核酸浓度、纯度测定来实现。根据原始样品的种类和核酸产物后续的各种应用目的，细胞裂解和核酸纯化步骤有不同的处理方法和要求。
实验室中的DNA提取
DNA提取过程最经济常用的方法为利用有机溶剂将裂解细胞后的蛋白杂质变性沉降，使DNA溶于液相中，再离心分离，整个分离利用的是生物分子的可溶性差异。其他DNA提取方法还有无机法（盐析法）、吸附法（微型柱）、磁珠法等。
案例：小鼠基因型判定实验的模板DNA提取
实验步骤：
1.将1cm尾巴切段置于1.5mL微量离心管中，加入适量裂解液（Lysis buffer）和蛋白酶（Proteinase K）于55~65℃水浴过夜消化。
2.充分消化后的尾巴样品加入沉淀液（Precipitation buffer）后用旋涡混匀器来使杂质蛋白充分沉淀，杂质沉淀后通过离心操作（如4℃，4000Xg，5min），取出溶有目标DNA的上清液，丢弃杂质沉淀。
3.上清液中加入100%异丙醇，小心颠倒离心管30~40次，便可以将产物DNA沉降。离心操作（4℃，10000Xg或12000rpm，10min）去除上清。
4.用75%乙醇洗涤两次DNA产物，待乙醇充分挥发后，用水或TE缓冲液（Tris-EDTA buffer）收获DNA模板产物。
进行后续的PCR扩增实验前，可以使用Nanodrop仪器进行DNA浓度和纯度的测定，提高PCR反应的成功率。在PCR扩增实验不顺利的情况下，也可以进一步对DNA产品的完整度进行检测。
室中的RNA提取实验
RNA提取过程与DNA类似，也是通过裂解细胞后通过有机溶剂沉降杂质的方法来分离RNA。但RNA的稳定性比DNA低很多，因此RNA提取对温度和污染清除的要求更高。实验操作一般从以下几个角度来提升成功率：降低RNA水解酶活性、提升RNA稳定性、使RNA与DNA和蛋白分离、仅沉降RNA、有效去除DNA。
案例：总RNA提取
实验中用到的耐思耗材和仪器
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