植物石蜡切片(番红-固绿染色)

一、目的要求
1、 熟悉植物石蜡切片的制作过程。
2、 掌握番红-固绿对染法的基本原理和具体方法。

二、实验原理
石蜡切片法也是在研究植物细胞的形态结构等方面常用的制片方法。它可以使植物材料
切成薄的薄片，又可以切成连续薄片，切片经染色，观察效果甚好。番红-固绿对染法，为植物制片上最普遍的一种二重染色法，其染色程序简单并能清晰地显示出细胞的结构。番红
为碱性染料，能使细胞核及木质化的细胞壁染成红色；固绿为酸性染料，能使细胞质及纤维
素的细胞壁染成绿色。

三、实验用品
（一） 器材
切片刀，切片机，温箱，温台，解剖刀，镊子，单面刀片，台木，毛笔，蜡铲，酒精灯，包
埋纸盒，染色缸，玻片盘，温度计，脸盆。
（二）试剂
FAA 固定液，1%番红，1%固绿，各级酒精（30%、50%、70%、80%、90%、95%、100%），二甲
苯，石蜡，郝普特氏明胶粘片剂，树胶。
试剂配法：
1、FAA 固定液（福尔马林-醋酸-洒精混合液）
福尔马林 5 ml
50%或 70%的洒 90 ml
冰醋酸 5 ml
此液适用于植物组织，此液中的酒精，有用 50%的，也有用 70%的，一般薄嫩的材料右用
50%的，厚硬的材料用 70%的，醋酸的用量也可根据材料情况作适当的改变，对一些大块而
密实的组织可增加用量，同时减少福尔马林的用量。固定时间可因材料及醋酸含量的变化而
异，一般为 5~20h。固定的材料，一般无需用水洗，可直接从 70%的酒精开始脱水。
1、 1%番红
番红 1g 溶于 100ml 水中。
2、 1%固绿
1g 固绿溶于 100ml95%酒精中。
3、郝普特氏明胶粘片剂
明胶 1g
蒸馏水 100ml
石炭酸 2g
甘油 15ml
配制时先将明胶溶解于 30℃的蒸馏水中（在水浴锅内进行），待溶解后再加石炭酸和甘油，
搅拌均匀后，趁热过滤，贮存于玻璃瓶中。
（三）材料
大豆、小麦、绿豆、洋葱、大蒜、蚕豆等。

四、实验程序
1、 取材
取已培养好的大豆、小麦、蚕豆根或茎、叶等用刀片将其尖端约 1.2cm 根尖切割下来，用刀片切割其成熟区部分成 5mm 长的小段（亦可切带侧根的部分），将切好的材料放入玻管中。
2、 固定
将 FAA 固定液倒入盛有材料的玻管中，固定时间为 24h。
3、 冲洗
用 70%酒精换洗 3 次，每次 0.5-2h。
4、 脱水
80%、90%酒精各 1-2h，纯酒精（中间换一次）1-2h。
5、 透明
等量纯酒精及二甲苯中 1-2h，二甲苯（中间换一次）1-2h。
6、 透蜡
方法同前。
7、 包埋
方法同前。
8、 切片
根为横切面，其厚度为 8~10um。
9、 贴片。
方法同前。
10、番红-固绿对染法染色程序如下：
（1）切片在二甲苯中脱蜡，约 10min。
（2）等量纯酒精二甲苯 5min。
（3）经纯酒精，95%、90%、80%、70%、505、305 各级酒精各 5min。
（4）蒸馏水 2-5min。
（5）1%番红水溶液染色 2h 左右。
（6）用水洗去多余染液。
（7）50%、70%、80%、90%、95%各级酒精脱水 10min。
（8）1%的固绿（用 95%酒精配制）染色 10-40s。
（9）95%酒精洗一下。
（10）纯酒精脱水 5min。
（11）等量纯酒精二甲苯混合液中 5min。
（12）二甲苯 5min。
（13）中性树胶封藏。
 
注意：
（1）番红与固绿在酒精中很容易脱色，因此在酒精中脱水时，不能放置太久。
（2）用固绿对染之前应检查番红染色的是否合适，所染颜色应稍深一些，以防其在以后脱
水步骤中仍会脱色，如果太浅，应退回重染。