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RAW 264.7细胞培养指南详解

2023-06-12     来源:本站     点击次数:2247

细胞介绍
每一种细胞都有自己的“脾气”,RAW 264.7更是如此,要想养好它,首先我们得充分了解它,比如生长特点、细胞形态、培养体系等,在这基础上,养好它自然也是“水到渠成”。
 
英文名称:RAW 264.7
中文名称:小鼠单核巨噬细胞白血病细胞
种属:鼠源
组织来源:Abelson鼠科白血病病毒诱导的肿瘤;单核细胞;巨噬细胞。
生长特性:贴壁生长(胰酶会刺激分化)
细胞形态:不规则性(圆形和梭形为主
传代比例:1:2-1:3
换液频率:2-3次/周
培养体系:DMEM(高糖)+10%特级胎牛血清(逍鹏C04001)+1%P/S
培养条件:5% CO2 ;37℃
 
 
RAW 264.7生长图片
 
RAW 264.7 细胞正确传代方法
RAW264.7细胞具有强吞噬能力,细胞在吞噬抗原后释放趋化因子,促使细胞分化出伪足,因此造成细胞难消化。RAW 264.7在传代过程中,不需要使用酶进行消化,酶消化会加速细胞的分化。现在比较常见的是吹打传代,此方法易于操作,也能很好地控制细胞的分化。

传代的步骤
第一步:用移液管将培养基中的培养液吸干净。
第二步:用 PBS 将细胞层清洗1至2遍。
第三步:用移液管吸取新鲜的培养基轻轻将细胞吹打下来,并将细胞吹打成单细胞悬液,注意吹打的力度,避免过重或者过轻。
第四步:将吹打好的单细胞悬液进行分装接种。
 
注意事项
  1. 根据逍鹏的经验,RAW264.7三天就可能分化,吹下的难度也大大增加,通过及时传代将RAW264.7的分化比例控制在合理的范围内,
  2. 该细胞不建议使用胰酶消化,胰酶会刺激分化,超过3天不传代细胞容易分化。培养时,存在少量分化细胞,属于正常现象。
  3. 推荐使用吹打传代,可以有效控制细胞分化。
  4. 当细胞的密度达到80%-90%的时候,最容易吹下;密度较低,不太好吹下来。
  5. 接种的密度需要控制好,推荐进行高比例的传代
  6. 推荐使用高质量的胎牛血清,血清的质量差异会导致贴壁能力的变化。
  7. 随着培养时间的增加,细胞呈现圆形并以叠加的形式生长。当细胞的密度增加到一个“临界点”的时候,会有细胞散落到培养基中,此时悬浮和贴壁的细胞会同时出现在视野中  。
  8. 由于堆积生长,有些细胞脱落漂浮,在传代时应收集起来,离心后细胞沉淀可以继续培养。              
  9. 切勿强制吹下所有的细胞,贴壁较牢或已分化的细胞可丢弃,就只需接种较容易吹打下来的未分化的细胞即可。
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