三种细胞活性检测法比较：发光法、荧光法和吸光度法
2023-09-07 来源:本站 点击次数:2603细胞活性检测已成为现代实验室的重要工具。高通量细胞活性检测广泛应用于筛选实验，如化合物毒性筛选，或识别选择性杀死癌细胞的化合物，还有一个常见用途是筛查环境毒素。
酶标仪可利用多种活性检测试剂盒测定吸光度（Abs）、荧光强度（FI）或化学发光（Lum），以量化细胞活性。如何为自己的研究做出最佳选择让用户犯了愁。
为此，我们选取基于吸光度、荧光和化学发光读数的三种市售细胞活性检测试剂盒，分别是CellTiter-Glo 2.0®（Promega）、Alamar blueTM和Vybrant®MTT（均来自Thermo Fisher Scientific；图1）。为了帮助客户做选择，我们使用HeLa细胞，在96孔板和384孔板中置入25-50000个细胞/孔，以建立标准曲线，对动态范围、检测下限和检测上限，以及处理方面的性能进行比较。
图1. Vybrant MTT、alamarBlue和CellTiter-Glo的细胞活性检测原理
活性检测灵敏度的比较
如图2所示，CellTiter-Glo的检测下限（LOD）最低，其次是alamarBlue和Vybrant MTT。通常来讲，384孔板支持检测较低的细胞数量，是由于底物/细胞比率较高。
图2. 使用HeLa细胞比较活性检测试剂盒的检测下限
活性检测动态范围的比较
在所有测定中都观察到细胞数量对应的信号有明显增强。然而，在最大浓度范围内观察到的线性关系随着细胞浓度的升高而减弱（图3A、B、C）。这种影响可能主要归因于底物的有限。底物转换/细胞比率在很大程度上取决于细胞类型和细胞培养条件，如FCS的可用性。在这种情况下，相对活跃的HeLa细胞使转换/细胞比率增高，使LOD降低，但同时在高细胞浓度下产生初期饱和效应。需要注意的是，制造商提供的建议是一般指导，在必要时，应对一些参数进行检查，提前根据您的实验条件进行调整。有可能涉及的调整参数包括细胞总数、细胞与试剂量的比率，以及对应的孵育时间。
图3. 384孔和96孔板的HeLa细胞活性标准曲线。（A）Vybrant MTT，Abs（B）AlamarBlue，FI（C）CellTiter-Glo，Lum。误差线代表8次重复
结论
BMG LABTECH的VANTAstar®酶标仪（图4）拥有高灵敏度，可覆盖大范围的细胞活性检测读数，提供完美的检测平台。配备光栅和光谱仪，在波长选择方面提供了充分的灵活性，这种灵活性同时体现在活性检测的选择。动态范围扩展技术（EDR）和自动聚焦调整使分析检测变得更加简单，无需进行初步增益或聚焦优化。
图4. VANTAstar酶标仪
CellTiter-Glo支持通过简单的添加和读取程序检测<10个细胞/孔，而AlamarBlue提供了FI或Abs检测两种选择，并且支持动力学监测，因为细胞不需要被裂解。AlamarBlue是最实惠的选择，其次是Vybrant MTT，最后是CellTiter-Glo。
转载自BMG LABTECH
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