固定和包埋组织蛋白提取试剂盒使用说明书
2023-10-18 来源:本站 点击次数:664福尔马林固定和石蜡包埋组织在生物医学研究中被广泛使用。但是从石蜡包埋组织中提取蛋白由于甲醛
会介导分子交联而变得异常困难，传统方法从石蜡包埋组织中提取蛋白需要使用有机溶剂重复脱蜡和水化，然后在高温下或不可避免的超声处理后提取蛋白。这些方法虽然在某些情况下是比较有效的，但是操作繁琐，需要消耗 3-4 小时。本试剂盒提供了一种简便，快速的方法，不需有机溶剂脱蜡。整个过程可以在不到 1 小时的时间内完成，蛋白产量可以高达 1-2 毫克/毫升。
应用：
提取的蛋白可用于 SDS-PAGE，WB，ELISA，免疫沉淀和蛋白质组学研究。
试剂盒组分(20T):
1. 缓冲液 A 30ml
2. 缓冲液 B 10ml
3. 研磨粉 2g
4. 1.5ml 离心管 20 个
5. 塑料研磨棒 2 根
储存：
常温运输，室温储存。
所需附加材料
台式离心机（最大离心力 14,000-16,000Xg）
加热块或者水浴锅
产品重要信息
本试剂盒可用于从石蜡包埋组织或者未经石蜡包埋但经过福尔马林固定的组织中提取总蛋白。
推荐将蛋白酶抑制剂在实验前加在Buffer B中。研究蛋白磷酸化，磷酸酶抑制剂（如罗氏）应在使用前加入Buffer B中。（请按照蛋白酶或磷酸酶抑制剂母液比例，例如母液是100x，添加时按照1：100添加，1ml缓冲液B添加10ul抑制剂）。蛋白浓度测定，推荐使用BCA试剂盒。
操作方法：
1. 用锋利的刀片将组织切成薄片。去除组织切片中多余的石蜡，组织切片厚度大约在10-20um，大小应在 30-60 平方毫米。取 4-5 个组织切片放入试剂盒提供的 1.5ml 离心管中。
2. 加入 0.7ml Buffer A，95℃加热容块或水浴中孵育 10 分钟。孵育后在离心管还是热的情况下，立刻 10,000Xg 室温离心 5-10s。用 1ml 吸头快速将所有上清吸干净。再加入 0.7ml 的 Buffer A 到管中，如上描述再次重复加热和离心操作一次。将上清去除干净。
3. 在沉淀中加入 200ul 的 Buffer B，再加入 80mg 研磨粉到管底。
4. 用研磨杵大力反复扭转匀浆 2-3min（研磨杵是重复使用的，可以用水洗干净用干面巾纸擦干即可）。盖上盖子，在加热容块上或水浴锅里 90-95℃热孵育 40 min 到 1h。热孵育后，12,000Xg离心 10 min，将上清（提取的蛋白）转移到一个新的离心管中，可以用 BCA 法测定蛋白浓度。蛋白可用于下游应用或存储于-80℃。
注意：Buffer B 的使用量请按照操作说明添加。它也可以根据样品的量放大或者降低。如果蛋白浓度低可以提高样品起始量。
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