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使用柱前衍生及柱后衍生法进行食品及饲料中伏马毒素检测

2023-12-04     来源:本站     点击次数:1203

✦ 关于伏马毒素  ✦
 
伏马毒素 (Fumonisin FB) 是一种霉菌毒素，是由串珠镰刀菌产生的代谢产物。主要污染粮食及其制品，并对某些家畜产生急性毒性及潜在的致癌性，已成为继黄曲霉毒素之后的又一研究热点。目前我国现行标准《食品安全国家标准食品中真菌毒素限量》（GB2761-2017）尚未涉及伏马毒素的限量，不过在《饲料卫生标准》（GB 13078—2017）规定了部分饲料原料和饲料产品中的FB1和FB2总量的限量标准。其中饲料原料玉米及其加工产品、玉米酒糟类产品、玉米青贮饲料和玉米秸秆中伏马毒素的限量为 60 mg/kg，其他饲料产品中伏马毒素的限量在5～50 mg/kg。
 
✦ 关于检测方法✦
 
GB 5009.240-2023 食品安全国家标准 食品中伏马菌素的测定 （将于2024年3月实施）

LS/T 6130-2017 粮油检验 粮食中伏马毒素B1、B2的测定 超高效液相色谱法


 
本方案采用IAC-107伏马毒素免疫亲和柱
 
IAC-107伏马毒素免疫亲和柱能够特异性的纯化与浓缩样品中的伏马毒素B1 、B2 、B3 . 伏马毒素免疫亲和柱广泛地应用于粮食、食品、饲料、等样品的提取，该方法速度快、操作简单、准确性高，对准确灵敏的测定样品中的伏马毒素起到十分重要的作用。
 
✦ 操作流程✦
 
一、样品前处理
 
1.样品提取及稀释
1.1 称取25.0g(精确到0.1g)过筛样品于均质杯中,加入乙腈水(5+5) 100mL，以均质器高速搅拌提取2min或振荡提取20min,定量滤纸过滤。 
1.2 移取2.0mI滤液加入48mL0.1%的吐温/PBS稀释混匀。
 
2.样品净化
2.1将免疫亲和柱连接于玻璃注射器下准确移取50.0mL上述样品溶液注入玻璃注射器中。
2.2将空气压力泵与玻璃注射器连接,调节压力使溶液以约1滴/s的流速缓慢通过免疫亲和柱,直至空气进入亲和柱中。
2.3用10mL水淋洗亲和柱流速为1滴/s~2滴/s.直至空气进入亲和柱中,弃去全部流出液，抽干小柱。
2.4准确加入3mL甲醇-乙酸溶液( 98+2 洗脱流速约为1滴/s,收集洗脱液。50°C下氮气浓缩吹干后，用乙腈水 (5+5) 定容至1 mL，待检测。
 
二、液相条件及衍生方法
 
柱前衍生法
色谱柱: Cloversil-C18 4.6*150mm (5um) 或4.6*250mm (5um)
流动相: 甲醇:0.1MNaH2PO4(77: 23 体积比)用磷酸将PH值调到3.3
检测器: 激发波长335nm 发射波长440nm
进样体积: 20uL
衍生方法：取100uL标准溶液或样品净化液于进样瓶中加入100uL OPA衍生试剂A涡旋混合30s，在 2分钟内进样分析。

柱后衍生法
色谱柱: Cloversil-C18 4.6*150mm (5um) 或4.6*250mm (5um)
流动相: 甲醇/(65+35)
检测器:激发波长335nm发射波长440mm
进样体积: 20uL
衍生泵流速: 0.4mL/min
衍生温度: 50℃
衍生泵流动相: OPA行生试剂B

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HP-L10柱后衍生系统  

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HP-L20柱后衍生系统
 
✦ 实验结果✦

1、柱效回收：

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2、样品添加回收：取玉米样品，伏马B1B2B3混标添加各1000ppb。

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3、标准品及样品图谱

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图1  柱前衍生标准品液相色谱图（出峰顺序B1，B3，B2）

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图2  柱后衍生标准品液相色谱图（出峰顺序B1，B3，B2）

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图3  玉米本底液相色谱图
图片图4  玉米加标液相色谱图
 
✦ 订购信息✦
 
本方案所需要的产品及仪器见下表
 
C/N编号 物品
HP-L10
HP-L20		 CLOVER柱后衍生装置
C1015 邻苯二甲醛 (HPLC 法用)
C1016 2-疏基乙醇(HPLC 法用)
ZJ0612 科乐福 CLOVER 多位位泵流操作架(配有1台空气泵，6个10mL 针简)
20202 高速匀质器，转速可达 18.000 r/in~22.000 r/min
31955-C 科乐福 CLOVER微纤维滤纸 (1.5um，100 张/盒)
31240-C 折叠式槽纹滤纸 (100 张/盒)，或中速定性滤纸
36010-C 一次性塑料烧杯(25/包)
34000-C 一次性无荧光测试管(250 支/包)
36020-C 塑料漏斗(10 个/包)
CLOVER-1ST7224/5/6 伏马毒素标准品 B1/B2/B3
35016 色谱纯级的甲醇(4升/瓶)
C546150-U 科乐福 Cloversil C18 反相色谱柱 4.6*150mm (5um)
C546250-U 科乐福 Cloversil C18 反相色谱柱 4.6*250mm (5um)
FCMF3-CCP320C 玉米、饲料等基质含有不同水平伏马毒素的质控样品(FAPAS/Trilogy)
相关公司： 北京中检维康生物技术有限公司
联系电话：400-6677-658/15010301983
邮箱: 1609095159@qq.com
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