PTI多肽合成仪快速合成多肽的使用过程介绍
2024-12-06 来源:本站 点击次数:498简介
通过PTI全自动多肽合成仪（Symphony X、Purepep Chorus），使用优化的 Fmoc 合成条件可以有效缩短多肽合成时间。通常，为了保证多肽的合成产量，传统的多肽合成方法会通过延长反应时间来实现，这意味着最终脱保护时间为 20-30 分钟，偶联时间为1小时或更长时间。并且人们普遍认为，提升速度是以牺牲纯度为代价的。然而，事实并非如此。实际上，当化学反应得到优化时，使用传统的 Fmoc 化学反应也可以以惊人的速度获得高纯度的肽。为了说明这一点，我们在PTI全自动多肽合成仪上合成了肽链A——人类胰岛素原 C 肽1，每个循环脱保护时间2 x 1.5 分钟、偶联时间2 x 2 分钟；裂解时间18分钟。
序列2（图1）：H-EAEDLQVGQVELGGGPGAGSLQPLALEGSLG-OH
图 1 合成肽的结构多肽合成：在 Symphony® X多肽合成仪上以 25 μmol 规模合成肽，在PurePep Chorus多肽合成仪上以 20 μmol 规模合成肽，使用 Fmoc-Gly-Wang 树脂 (0.41 mmol/g)。合成方案如下，脱保护，20%Pip，反应2 x 1.5 分钟；偶联，0.1 M AA （AA/PyBOP/DIPEA，当量比0.9/1/1） 反应2 x 2分钟；裂解，混合溶液TFA/TIS/H2O/EDT （94:1:2.5:2.5，V/V ）反应18分钟。
分析：在 Varian Pro-Star HPLC 上，使用 Varian Microsorb C-18 柱（4.5 x 250 毫米）分析肽，使用含0.1% TFA水、0.1% TFA乙腈缓冲系统，在 60 分钟内以 5-95% 的梯度递增乙腈溶剂；检测波长为 214 nm。
结果
合成结果HPLC检测如图 2 和图 3 所示
图 2 Symphony X 上 C 肽的 HPLC 结果
图 3 PurePep Chorus 上 C 肽的 HPLC 结果
结论
传统 Fmoc 化学在优化后能够在PTI多肽合成仪上实现快速的多肽合成。32 聚体 C 肽在PurePep Chorus上则只用了 8.7 小时。
参考
1.W.F. Heath, R.M. Belagaje, G.S. Brooke, R.E. Chankce, J.A.Hoffmann, H.B. Long, S.G. Reams, C. Roundtree, W.N. Shaw, L.J. Slieker, K.L. Sundell, R.D. Dimarchi. J. Biol. Chem. 267,419 (1992).
2.C 端谷氨酰胺被甘氨酸取代
PTI全自动多肽合成仪特点简介
Symphony X全自动高通量多肽合成仪
- 24个独立反应通道
- 支持原位活化和预活化
- 8个试剂瓶，40个氨基酸位置
- Single-ShotTM特殊氨基酸传输技术
- 内置专利设计的PurePep Pathway流路系统
- 红外加热（选配，第一个通道）
- IntelliSynthTM UV监测（选配，第一个通道）
- 肽预测软件
- 远程邮件提醒
- 自动多肽纯化
- 软件设计符合21 CFR Part 11合规性
- 自动原位切肽
PurePep Chorus全自动多通道平行多肽合成仪
- 唯一的三位一体系统（合成、切割、纯化）
- 可配置2、4或6个反应容器
- 选配可控感应加热和振荡混匀
- 选配实时紫外线监测
- 内置PurePep Pathway流路系
- Single ShotTM液体传输技术
- 直观的操作软件
- 自动原位切肽
- 自动多肽纯化
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