Thp-1单核细胞的培养、冻存和复苏细节介绍
2025-02-25 来源:本站 点击次数:1102
细胞简介
该细胞是从一名1岁的患有急性单核细胞性白血病的男孩的外周血中分离建立。该细胞可以吞噬乳胶颗粒和激活的红细胞，细胞膜和胞浆内均没有免疫球蛋白，表达C3R和FcR；可受佛波酯TPA诱导向单核系方向分化；可作为转染宿主。
细胞信息
细胞名称：Thp-1人单核细胞白血病
生长特性：悬浮、低密度容易聚团，高密度分散
倍增时间：60-70 小时 （PubMed= 6970727 ）; 26 小时 （PubMed= 25984343 ）; ~35-50 小时 （DSMZ=ACC-16）
换液频次：2~3次/周
传代比例：1:2-1:4（具体情况视实际细胞量决定）细胞密度在8X106/ml 进行传代，不要超过1X106/ml
培养基推荐配方 ：RPMI-1640（中乔新舟 货号：ZQ-200）+10%胎牛血清（中乔新舟 货号：ZQ0500）+1%双抗（中乔新舟 货号：CSP006）+β-Mer 终浓度：0.05mM（中乔新舟 货号：CSP005，例：500ml添加500ul）
β-Mer（巯基乙醇）的作用：β-巯基乙醇是一种常用的培养补充剂，有抗氧化的作用，可减少氧化应激对THP-1细胞的影响。当细胞密度过大但需要维持时，可适当增加巯基乙醇的比例（不超过标准量的1.5倍）。
（该图片引用ATCC细胞培养参考图）
THP-1细胞复苏
THP-1细胞复苏后通常需要3-5天恢复状态，细胞对密度有一定依赖性，如果复苏时离心去除了冻存液，建议复苏后48小时内不要进行操作。密度低时细胞会抱团生长属于细胞快速增殖生长的一个阶段，是正常情况。
THP-1细胞的传代
A、THP-1细胞为悬浮细胞且具有低密度依赖性，当细胞密度达到8×105个活细胞/ mL时需要进行传代。细胞密度不要超过1×106活细胞/ mL。
B、比例一般为1:2-4，可以分瓶后补充培养液，不需要离心，t25培养瓶分瓶后补充新鲜完全培养基到7ml，
C、如果对悬浮细胞密度把控不好，最佳的方式是进行细胞计数。
D、培养一周左右可以离心一次，以去除一些死细胞。
（ 中乔新舟出库细胞图4X ，该图片室温放置5min拍照，该密度可进行传代，细胞计数密度为1.2X106/ml）
THP-1细胞的冻存
A、用10%DMSO：900ul FBS + 100ul DMSO （有毒小心操作）或直接用无血清细胞冻存液。
B、收集生长状态较好的细胞于15 mL离心管中，调整细胞浓度至细胞数量大约200万-300万/mL冻存液为宜。
C、根据情况放入-80℃培养箱最多放置3个月，尽快转移到液氮中进行长期保存。
THP-1培养常见问题
1、THP-1细胞在培养过程中细胞发生聚团怎么办？
少量细胞聚团，呈葡萄串状，属于正常现象，特别是细胞密度较低时，易出现这种情况。密度高时，细胞会自然分散开，如果密度高聚团还是很严重，通过观察细胞状态、巯基乙醇添加量、或更换血清品牌或增大血清比例（不超过20%）有助于解决聚团问题。
2、THP-1细胞在培养过程中细胞发生贴壁怎么办？
(中乔新舟细胞客户咨询图)
2.1 THP-1细胞培养过程中出现少量细胞贴壁属于正常情况，不需要担心。可以轻吹收集细胞或者丢弃贴壁部分细胞。
2.2 但如果当贴壁细胞比例高于20%，说明细胞生长环境有异常，这时候就需要排查培养箱温度及CO2浓度、培养基成分以及培养器皿是否异常。可用非TC处理过的培养瓶，不利于细胞贴壁。
3、THP-1复苏不起来怎么办？
3.1 该细胞冻存后复苏率较低，冻存时请酌情提高细胞量，冻存时活细胞密度不能低于100万-300万/mL，同时复苏密度也有依赖性，细胞复苏后需要培养3-5天状态才能恢复，如有细胞碎片，待细胞密度增大后通过低速离心去除。
3.2该细胞为悬浮细胞，在培养时更喜欢温和处理，细胞密度低时，培养时尽量少对细胞进行离心处理以此造成对细胞的伤害。换液时不要全培养基更换。
3.3 THP-1细胞中需要添加β-巯基乙醇，现用现配，不可直接添加至完培中长期储存，会影响β-巯基乙醇的稳定性。
该细胞是从一名1岁的患有急性单核细胞性白血病的男孩的外周血中分离建立。该细胞可以吞噬乳胶颗粒和激活的红细胞，细胞膜和胞浆内均没有免疫球蛋白，表达C3R和FcR；可受佛波酯TPA诱导向单核系方向分化；可作为转染宿主。
细胞信息
细胞名称：Thp-1人单核细胞白血病
生长特性：悬浮、低密度容易聚团，高密度分散
倍增时间：60-70 小时 （PubMed= 6970727 ）; 26 小时 （PubMed= 25984343 ）; ~35-50 小时 （DSMZ=ACC-16）
换液频次：2~3次/周
传代比例：1:2-1:4（具体情况视实际细胞量决定）细胞密度在8X106/ml 进行传代，不要超过1X106/ml
培养基推荐配方 ：RPMI-1640（中乔新舟 货号：ZQ-200）+10%胎牛血清（中乔新舟 货号：ZQ0500）+1%双抗（中乔新舟 货号：CSP006）+β-Mer 终浓度：0.05mM（中乔新舟 货号：CSP005，例：500ml添加500ul）
β-Mer（巯基乙醇）的作用：β-巯基乙醇是一种常用的培养补充剂，有抗氧化的作用，可减少氧化应激对THP-1细胞的影响。当细胞密度过大但需要维持时，可适当增加巯基乙醇的比例（不超过标准量的1.5倍）。
（该图片引用ATCC细胞培养参考图）
THP-1细胞复苏
THP-1细胞复苏后通常需要3-5天恢复状态，细胞对密度有一定依赖性，如果复苏时离心去除了冻存液，建议复苏后48小时内不要进行操作。密度低时细胞会抱团生长属于细胞快速增殖生长的一个阶段，是正常情况。
THP-1细胞的传代
A、THP-1细胞为悬浮细胞且具有低密度依赖性，当细胞密度达到8×105个活细胞/ mL时需要进行传代。细胞密度不要超过1×106活细胞/ mL。
B、比例一般为1:2-4，可以分瓶后补充培养液，不需要离心，t25培养瓶分瓶后补充新鲜完全培养基到7ml，
C、如果对悬浮细胞密度把控不好，最佳的方式是进行细胞计数。
D、培养一周左右可以离心一次，以去除一些死细胞。
（ 中乔新舟出库细胞图4X ，该图片室温放置5min拍照，该密度可进行传代，细胞计数密度为1.2X106/ml）
THP-1细胞的冻存
A、用10%DMSO：900ul FBS + 100ul DMSO （有毒小心操作）或直接用无血清细胞冻存液。
B、收集生长状态较好的细胞于15 mL离心管中，调整细胞浓度至细胞数量大约200万-300万/mL冻存液为宜。
C、根据情况放入-80℃培养箱最多放置3个月，尽快转移到液氮中进行长期保存。
THP-1培养常见问题
1、THP-1细胞在培养过程中细胞发生聚团怎么办？
少量细胞聚团，呈葡萄串状，属于正常现象，特别是细胞密度较低时，易出现这种情况。密度高时，细胞会自然分散开，如果密度高聚团还是很严重，通过观察细胞状态、巯基乙醇添加量、或更换血清品牌或增大血清比例（不超过20%）有助于解决聚团问题。
2、THP-1细胞在培养过程中细胞发生贴壁怎么办？
(中乔新舟细胞客户咨询图)2.1 THP-1细胞培养过程中出现少量细胞贴壁属于正常情况，不需要担心。可以轻吹收集细胞或者丢弃贴壁部分细胞。
2.2 但如果当贴壁细胞比例高于20%，说明细胞生长环境有异常，这时候就需要排查培养箱温度及CO2浓度、培养基成分以及培养器皿是否异常。可用非TC处理过的培养瓶，不利于细胞贴壁。
3、THP-1复苏不起来怎么办？
3.1 该细胞冻存后复苏率较低，冻存时请酌情提高细胞量，冻存时活细胞密度不能低于100万-300万/mL，同时复苏密度也有依赖性，细胞复苏后需要培养3-5天状态才能恢复，如有细胞碎片，待细胞密度增大后通过低速离心去除。
3.2该细胞为悬浮细胞，在培养时更喜欢温和处理，细胞密度低时，培养时尽量少对细胞进行离心处理以此造成对细胞的伤害。换液时不要全培养基更换。
3.3 THP-1细胞中需要添加β-巯基乙醇，现用现配，不可直接添加至完培中长期储存，会影响β-巯基乙醇的稳定性。
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