Degrasyn (T6300)，CAS: 856243-80-6 是一种可用于研究的低分子化合物，能抑制特定去泛素化酶（USP5、UCH-L1、USP9x、USP14 与 UCH37），并同时抑制 Bcr-Abl，从而下调其向 JAK2 的信号传递并削弱 STAT 的活化。其作用机制在于阻断这些去泛素化酶对底物上泛素链的切除与重塑，直接影响蛋白稳定性、信号复合体的装配以及信号的时程。由于 Degrasyn 不抑制 20S 蛋白酶体核心，其效应主要归因于去泛素化层面的信号与稳态调控，而非整体蛋白降解的抑制，这为解析“去泛素化—信号转导—细胞命运”之间的因果关系提供了清晰的化学切口[2]。在细胞功能层面，Degrasyn 的去泛素化酶抑制会增加泛素化底物负荷，诱发蛋白稳态压力并启动以选择性自噬为核心的缓冲反应以清除富含泛素的蛋白装配；当该适应反应不足以应对压力，或关键生存节点被动摇时，凋亡程序被引发，这与其在“自噬/凋亡”维度上的表型注解一致。

与此同时，Degrasyn 直接抑制构成性活化的酪氨酸激酶 Bcr-Abl，进而在上游抑制 JAK/STAT 轴：Bcr-Abl 被抑制后，JAK2 活性下降，STAT 的磷酸化与转录激活受限。鉴于 STAT 转录因子主导多种与生长、生存及应激适应相关的基因表达网络，对 Bcr-Abl–JAK2–STAT 级联的快速干预可在去泛素化受阻带来的蛋白毒性压力背景下，推动细胞命运向凋亡方向偏移[1]。

基于上述双重机制，Degrasyn 适用于剖析泛素系统与酪氨酸激酶信号的耦合。于信号通路研究中，可利用 Degrasyn 同步削弱 Bcr-Abl 介导的 JAK/STAT 读出（如 STAT 磷酸化及靶基因诱导）并扰动 DUB 调控的泛素周转，从而实现对两条通路时序性与因果性的联合描绘；在蛋白稳态与自噬研究中，因其不抑制 20S 蛋白酶体，可在保留蛋白降解主轴功能的条件下，选择性提高泛素化负荷以量化自噬通量及 USP5、UCH-L1、USP9x、USP14、UCH37 等对链型编辑的贡献；在细胞死亡研究中，则可用于界定“泛素压力—生存信号削弱—凋亡执行”的阈值与耦合点。综上，Degrasyn 为连接 Bcr-Abl、DUB、JAK、自噬与凋亡通路的综合研究提供了高效化学工具[1,2]。

▲ 通过CCK-8增殖检测、台盼蓝拒染法评估细胞活力、Hoechst 33342/PI荧光染色观察细胞凋亡形态，并在T-ALL患者及正常对照来源的PBMCs中验证细胞毒性，综合证实Degrasyn可浓度依赖性抑制T-ALL细胞系（Jurkat、Molt-4、HPB、CCRF-CEM）的增殖并降低其活力。

Degrasyn (T6300) 在体内外均降低T‑ALL细胞活力并诱导凋亡。其在多种T‑ALL细胞系中呈剂量依赖性抑制增殖，同时提高PI染阳性和Annexin V阳性细胞比例，并伴随PARP1与caspase‑3裂解，指示凋亡被激活。机制上，Degrasyn可直接与USP24的活性位点口袋结合，导致其底物Mcl‑1水平下降，并通过USP24–Mcl‑1轴加速线粒体跨膜电位崩塌以诱导凋亡。实验结果表明，Degrasyn显著降低USP24与Mcl‑1蛋白水平，增强Mcl‑1的K48‑连接型泛素化，并显著降低线粒体膜电位。进一步地，USP24的再激活可明显阻止Degrasyn诱导的Jurkat细胞凋亡，而Mcl‑1过表达可消除其促凋亡效应，支持其依赖USP24–Mcl‑1途径。于异种移植模型中，Degrasyn腹腔给药显著抑制肿瘤生长，并降低肿瘤组织中USP24与Mcl‑1水平，表明其在体内抑制T‑ALL细胞生长并抑制USP24活性。[3]

▲ 通过Western blot检测Rottlerin处理不同时间点GPX4和SLC7A11蛋白水平、溶酶体/蛋白酶体抑制剂干预实验、CHX追踪实验、PKCδ敲低后蛋白表达变化、及联合Degrasyn等多种去泛素化酶抑制剂处理后的蛋白表达与泛素化水平变化，综合证实Degrasyn作为去泛素化酶抑制剂可协同Rottlerin促进SLC7A11和GPX4的降解。

Degrasyn (T6300) 被明确描述为去泛素化酶抑制剂，靶向USP9x、USP5、USP14与UCH37。在本研究的细胞实验中，HLE细胞以10 μM Degrasyn预处理1小时，随后接受5 μM rottlerin作用24小时。文献通过点明Degrasyn所抑制的去泛素化酶种类，并给出在HLE细胞中的具体用量与时间设置，界定了其在实验流程中的使用方式与定位。上述信息表明，Degrasyn在该研究中作为多靶点去泛素化酶抑制工具化合物被应用，其分子功能与在细胞体系中的使用条件（浓度与处理时程）均有清晰记载，从而为后续实验步骤提供了已定义的抑制背景与操作参数。[4]

▲ 通过免疫共沉淀实验证实，Degrasyn处理可显著增强YAP1的泛素化修饰，表明USP24介导的YAP1去泛素化可被Degrasyn有效抑制。

Degrasyn (T6300) 被用于检验USP24对YAP1去泛素化活性的影响。在细胞水平的泛素化实验中，研究者在HEK293T细胞中共同转染相关质粒，并在收集细胞前加入Degrasyn，以评估其对USP24催化作用的影响。在该实验体系中，Degrasyn以10 µM的浓度处理8小时，随后进行免疫沉淀与免疫印迹以检测YAP1的泛素化状态。结果显示，Degrasyn阻断了USP24从YAP1上去除泛素链的能力，表明Degrasyn在该条件下可以功能性抑制USP24对YAP1的去泛素化活性。由此可见，Degrasyn在细胞内有效干预USP24的催化过程，使YAP1维持于被泛素化的状态，这一结论得到在规定处理时间后进行的生化检测所直接支持。上述发现明确了Degrasyn作为研究USP24调控YAP1泛素化状态的化学工具的作用，并在该实验体系中展示了对USP24去泛素化活性的抑制效应。[5]

Degrasyn通过抑制特定的去泛素化酶（USP5、UCH-L1、USP9x、USP14、UCH37）并直接抑制持续活化的酪氨酸激酶Bcr-Abl，从而干扰下游JAK2-STAT信号通路。其双重机制阻断底物上泛素链的切除与重塑，增加泛素化蛋白负荷，引发蛋白稳态压力，激活选择性自噬，若适应不足则诱导细胞凋亡。文献表明，Degrasyn通过USP24–Mcl-1轴显著降低T-ALL细胞活力并诱导凋亡，且在体内异种移植模型中有效抑制肿瘤生长；同时该化合物用于抑制USP24对YAP1的去泛素化活性，并在肝细胞癌细胞研究中具有明确的使用条件。未来研究可利用Degrasyn深入解析泛素编辑与激酶驱动转录程序之间的时序因果关系，拓展其在蛋白稳态与细胞死亡领域的应用，并探索其在异常泛素与酪氨酸激酶信号相关肿瘤中的治疗潜力。

Q1: Degrasyn的主要分子作用机制是什么？

A1: Degrasyn通过抑制特定去泛素化酶（USP5、UCH-L1、USP9x、USP14、UCH37）并抑制Bcr-Abl激酶活性，阻断底物泛素链的切除和下游JAK2-STAT信号传导，导致泛素化蛋白负荷增加，蛋白稳态压力增强，激活自噬并最终诱导凋亡。

Q2: Degrasyn如何影响T细胞急性淋巴细胞白血病（T-ALL）细胞？

A2: Degrasyn通过作用于USP24–Mcl-1通路，降低USP24和Mcl-1蛋白水平，增强Mcl-1的泛素化，促使线粒体膜电位崩塌，从而抑制T-ALL细胞增殖并诱导凋亡，在异种移植模型中显著抑制肿瘤生长。

Q3: Degrasyn在实验研究中通常用于哪些方面？

A3: Degrasyn被用来剖析泛素系统与酪氨酸激酶信号的耦合，选择性提高泛素化负荷以量化自噬通量，不抑制蛋白酶体以保持蛋白降解功能，以及探究泛素压力与凋亡信号的阈值和耦合点。

[1] Levy DE, Darnell JE Jr. Stats: transcriptional control and biological impact. Nat Rev Mol Cell Biol. 2002;3(9):651-662.

[2] Komander D, Rape M. The ubiquitin code. Annu Rev Biochem. 2012;81:203-229.

[3] Luo H, Jing B, Xia Y, Zhang Y, Hu M, Cai H, et al.. WP1130 reveals USP24 as a novel target in T-cell acute lymphoblastic leukemia. Cancer Cell International. 2019;19(1):.

[4] Luo H, Jin X, Gao C, Deng Q, Han L, Hu F, et al.. Rottlerin triggers dual degradation of SLC7A11 and GPX4 to drive ferroptosis and chemosensitization in hepatocellular carcinoma. Cell Death Discovery. 2026;12(1):.

[5] Shan H, Yuan J, Xian L, Li W, Ge Y, Zhang L, et al.. USP24 promotes hepatocellular carcinoma progression by deubiquitinating and stabilizing YAP1. Cancer Cell International. 2025;25(1):.