TR-FRET FcRn结合检测体系的技术原理、优势及实验流程
2026-11-04 来源:本站 点击次数:25
在抗体药物研发赛道，半衰期是评价抗体分子成药性的关键指标，而FcRn（新生儿 Fc 受体）与IgG的相互作用，直接决定抗体在体内的循环半衰期。筛选、优化抗体分子，快速评估候选抗体和FcRn的结合活性，是抗体早期筛选、Fc结构改造工作里绕不开的实验环节。
传统FcRn结合检测方法操作繁琐，孵育洗涤步骤多，通量低，很难适配大量候选分子的初筛需求。有没有省时省力、免洗涤、适合高通量筛选的检测方案？ TR-FRET FcRn 结合检测体系，基于均相时间分辨荧光TR-FRET技术，为科研工作者提供高效的人源 FcRn-IgG 相互作用检测工具。
一、技术原理
检测体系采用竞争型TR-FRET均相检测体系，全程省去洗涤步骤。 体系中，Eu标记抗-Tag1抗体作为供体，识别Tag1-FcRn蛋白；Ac标记IgG作为受体。当供体与受体空间靠近，会发生荧光共振能量转移，在665 nm处产生信号。当待测抗体药物存在时，会和Ac-标记IgG竞争结合FcRn蛋白。待测抗体结合FcRn越强，Ac-IgG被竞争解离越多，665 nm检测信号就越低。信号下降程度，直接对应候选抗体与FcRn的结合能力，可用于计算IC50，量化分子结合活性。
简单来说：信号强弱=竞争结合强弱，通过剂量-反应曲线，即可直观对比不同抗体分子FcRn结合特性。
二、检测体系亮点
1、均相免洗操作：无洗涤步骤，减少样品损失、降低人为操作带来的实验误差，384 孔板高通量模式，适合大批量候选抗体初筛。
2、人源FcRn体系：采用Human FcRn蛋白，模拟人体真实结合环境，用于评估人源抗体、改造Fc变体分子的结合能力。
3、完整配套组分：检测体系包含Tag1-FcRn蛋白、IgG校准品、Eu标记抗体、Ac标记IgG、检测缓冲液，提供100T-10000T多种规格，满足小试到规模化筛选需求，所有组分-80℃保存，建议分装避免反复冻融。
4、成熟数据分析方案：说明书直接给出Ratio、净信号、CV值计算公式，配合 TR-FRET读板仪，激发320/340 nm，读取620 nm、665 nm双波长信号，快速输出 IC50、S/B等关键实验参数，可直接用于实验报告整理。
5、广泛应用场景：抗体药物早期分子筛选、Fc结构域改造效果验证、不同IgG亚型FcRn结合活性对比、候选分子半衰期体外预判研究。
三、实验流程
整套实验操作逻辑清晰，以384孔浅孔白板为检测载体，操作参考如下：
四、实验数据
TR-FRET酶标仪采集双波长荧光，套用检测体系内置公式计算Ratio，绘制剂量反应曲线，得到IC50值，完成FcRn结合活性定量评估。
图： TR-FRET FcRn 结合检测体系验证数据
传统FcRn结合检测方法操作繁琐，孵育洗涤步骤多，通量低，很难适配大量候选分子的初筛需求。有没有省时省力、免洗涤、适合高通量筛选的检测方案？ TR-FRET FcRn 结合检测体系，基于均相时间分辨荧光TR-FRET技术，为科研工作者提供高效的人源 FcRn-IgG 相互作用检测工具。
一、技术原理
检测体系采用竞争型TR-FRET均相检测体系，全程省去洗涤步骤。 体系中，Eu标记抗-Tag1抗体作为供体，识别Tag1-FcRn蛋白；Ac标记IgG作为受体。当供体与受体空间靠近，会发生荧光共振能量转移，在665 nm处产生信号。当待测抗体药物存在时，会和Ac-标记IgG竞争结合FcRn蛋白。待测抗体结合FcRn越强，Ac-IgG被竞争解离越多，665 nm检测信号就越低。信号下降程度，直接对应候选抗体与FcRn的结合能力，可用于计算IC50，量化分子结合活性。
简单来说：信号强弱=竞争结合强弱，通过剂量-反应曲线，即可直观对比不同抗体分子FcRn结合特性。
图： TR-FRET FcRn 结合检测体系工作原理
二、检测体系亮点
1、均相免洗操作：无洗涤步骤，减少样品损失、降低人为操作带来的实验误差，384 孔板高通量模式，适合大批量候选抗体初筛。
2、人源FcRn体系：采用Human FcRn蛋白，模拟人体真实结合环境，用于评估人源抗体、改造Fc变体分子的结合能力。
3、完整配套组分：检测体系包含Tag1-FcRn蛋白、IgG校准品、Eu标记抗体、Ac标记IgG、检测缓冲液，提供100T-10000T多种规格，满足小试到规模化筛选需求，所有组分-80℃保存，建议分装避免反复冻融。
4、成熟数据分析方案：说明书直接给出Ratio、净信号、CV值计算公式，配合 TR-FRET读板仪，激发320/340 nm，读取620 nm、665 nm双波长信号，快速输出 IC50、S/B等关键实验参数，可直接用于实验报告整理。
5、广泛应用场景：抗体药物早期分子筛选、Fc结构域改造效果验证、不同IgG亚型FcRn结合活性对比、候选分子半衰期体外预判研究。
三、实验流程
整套实验操作逻辑清晰，以384孔浅孔白板为检测载体，操作参考如下：
图： TR-FRET FcRn 结合检测体系操作流程
四、实验数据
TR-FRET酶标仪采集双波长荧光，套用检测体系内置公式计算Ratio，绘制剂量反应曲线，得到IC50值，完成FcRn结合活性定量评估。
图： TR-FRET FcRn 结合检测体系验证数据
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