8大预制胶体系，总有一款适合你！万生昊天选型攻略请查收！

做 WB，选对胶是第一步。

Tris-Gly、Bis-Tris、HEPES、Tricine、Acetate、Blue Native、Phos-key、Zymogram……

体系太多，容易挑花眼。

01 搞懂两个底层逻辑

①固定浓度 vs 梯度

固定浓度胶孔径上下一致，固定浓度胶（如8%、10%、12%）孔径固定，适用于分离特定分子量范围的蛋白，但分辨率相对有限；

梯度胶（如4-12%、4-20%）内部浓度呈梯度变化，顶部孔径大、底部孔径小，可以同时分离大分子和小分子蛋白，分离范围更广、分辨率更高。

②变性 vs 非变性

两者的胶本身一样，区别只在电泳缓冲液里有没有 SDS：

   ●含 SDS → 蛋白变性、带上负电荷，按分子量分离 → 常规 WB

02  8 大体系速查表 

03 常见场景选型指南 

● 常规 WB，不确定选啥 → Tris-Gly（最经典通用）或 Bis-Tris（中性 pH 体系，减少蛋白降解，条带更锐利）

● 目标蛋白 <10 kDa → Tris-Tricine，专为小分子和多肽设计，配小分子专用上样缓冲液

●目标蛋白 >200 kDa → Tris-Acetate，低浓度醋酸体系，大分子跑得更开

●看天然构象 / 蛋白复合物 → Blue Native，全程无 SDS，保留天然状态

● 看磷酸化 → Phos-key，胶内复合物特异性结合磷酸化蛋白，降低其迁移率，实现磷酸化与非磷酸化分离

● 做酶谱（如明胶酶谱） → Zymogram，胶内含底物，电泳后复性、孵育即可显示活性条带

1.看分子量：小 → Tricine； 大 → Acetate； 常规 → Tris-Gly / Bis-Tris

2. 看实验目的：变性 → SDS 体系； 非变性 → Blue Native； 看活性 → Zymogram；看磷酸化 → Phos-key

3. 看配套试剂：上样缓冲液、电泳缓冲液、转膜液一次配齐，别到用的时候才发现缺一样。选胶没那么复杂，按这三步走就行。

 • Q1：梯度胶一定比固定浓度胶好吗？

✘ 不一定，看你要什么。目标分子量明确且比较集中（比如就看 40–60 kDa 这一段），固定浓度胶在这段的分离度更集中，条带更好判断；梯度胶的优势是“一块胶覆盖宽范围”，适合样品分子量未知、或者一次要在一块胶上看几个分子量相差很大的靶标。  

 • Q2：上样缓冲液能互相混用吗？

✘ 不建议，配方本来就不一样：

- ES016 / ES003：常规还原型（含 SDS + 还原剂），Tris-Gly、Bis-Tris、Hepes-Tris 通用

- ES001：小分子专用，配 Tricine 用，避免小肽跑丢

- ES002：非还原，不含还原剂，Zymogram 保活性用

- ES014：磷酸化专用，配 Phos-key

 •Q3：Zymogram 为什么一般不转膜？

因为它看的是酶活，不是蛋白量。胶里预先掺了底物（比如明胶），电泳后要先复性让酶恢复构象，再孵育让酶降解底物，染色后才能看到白色的活性条带——一转膜，活性的位置信息就丢了。