美国Anaspec最近上市基于最长波长FRET萤光技术的钙蛋白酶活性检测试剂盒(SensoLyteTM 520 Calpain Activity Assay)。此试剂盒含有5-FAM/QXL 520 FRET底物。将FRET底物降解后会产生两个片断,然后释放出5-FAM萤光,在波长490/520nm可检测到。萤光强度与钙蛋白酶活性成正比。此试剂盒可测出钙蛋白酶1 (m) 和 2 (m)的活性,适用于钙蛋白酶动力学研究。5-FAM萤光波长比较长,不易受到生物检测样品中成分可能存在的自发性萤光的干扰。
钙蛋白酶属于细胞内半胱氨酸蛋白酶,有15种以上的序列和组织特异性亚型,其中钙蛋白酶µ和m的特性较清楚,也称为钙蛋白酶1和2。钙蛋白酶的活性依赖于钙离子,通过选择性降解对许多蛋白起调控功能。研究表明,钙蛋白酶与许多钙调节的细胞内活动有关。例如:信号传导、细胞增殖分化、细胞周期变化、凋亡和血小板活性。钙蛋白酶活性降低与某些病理现象有关,例如:动脉硬化、老年痴呆症、糖尿病和癌症。钙蛋白酶是药物研发中很有前景的研究课题。
Anaspec提供基于FRET和AMC两种不同技术的钙蛋白酶检测试剂盒。
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Read-out |
Fluorimetric, FRET based (5-FAM/QXL™ 520) |
Fluorimetric |
Wavelengths |
Ex/Em= 490/520 nm |
Ex/Em= 354/442 nm |
Fluorescence |
Green |
Blue |
Lowest Detection Limit |
0.04 uM |
0.25 uM |
Kit size (96-well plate) |
100 tests |
100 tests |
Assay time |
As short as 1h |
As short as 1h |
Inhibitor screening |
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Product |
Catalog # |
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72149 |
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72150 |
参考文献:
1. Goll, DE. et al.
Physiol. Rev. 83, 731 (2003).
2. Suzuki K, et al.
Diabetes. 53 Suppl 1, S12 (2004).
3. Zatz M, et al:
N Engl J Med. 352, 2413 (2005).
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Biochem Biophys Res Commun. 322, 1098 (2004).
5. Carragher NO.
Curr Pharm Des. 12, 615 (2006).
6. Saez ME. et al.
Drug Discovery Today 11, 917 (2006).
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