环凯推出恒温扩增荧光法检测试剂盒
2017-11-07 来源:www.huankai.com 点击次数:16637环凯近期推出全新高通量快速检测试剂盒，该试剂盒基于基于环介导恒温扩增技术(LAMP)荧光法检测技术，无需常规PCR中变性、退火、延伸等步骤不同温度设计要求，只需提供一个适宜的恒定温度即可。
一、技术原理：
试剂盒基于环介导恒温扩增技术(LAMP)荧光法检测，利用两对特殊引物和具有链置换活性的Bst DNA聚合酶，使模板两端引物结合处循环出现环状单链结构，引物顺利与模板结合并进行链置换扩增反应，实现在恒温条件下（60-65℃）进行连续快速扩增。反应体系中加入了显色指示剂，阴阳性结果显色差异显著，扩增结束后可以通过观察荧光显色剂的颜色变化判读结果，无需开盖避免了扩增产物交叉感染性的可能性。LAMP是一种新型的恒温核酸扩增技术，与常规PCR相比，LAMP技术更适合现场高通量快速检测，具有简单、快速、特异性强的特点。
二、应用范围
恒温扩增荧光法检测技术可运用于快速检测食品中的沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌、单核增生李斯特菌、副溶血弧菌、大肠杆菌O157：H7、阪崎肠杆菌、小肠结肠耶尔森氏菌、铜绿假单胞菌、粪肠球菌、产气荚膜梭菌等微生物检测。
应用于食品快速检测有两种方式：
1、快速筛查。对食品样品快速增菌后，直接采用基因检测试剂盒来快速筛查有没可疑致病菌（对大多数致病菌在13小时内即可完成筛查）；
2、快速鉴定。对食品样品进行增菌，平板分离，使用基因检测试剂盒对可疑菌落进行快速准确的鉴定（1小时内完成鉴定）。
三、快速筛查食品中致病菌操作流程
四、快速鉴定可疑菌落操作流程
五、环凯恒温扩增试剂盒特点
操作简单：通过几部加样后，60-65℃范围内恒温条件下即可完成扩增。
使用便捷：一管式冻干，免去繁琐的配制步奏。
仪器简单：扩增条件简单，能提供恒温装置即可。
特异性高：比传统PCR灵敏度高10-100倍，可检测5-20个拷贝。
快速判读：使用合适的增菌液收集到足够菌体后，40-60分钟内可完成检测，肉眼观察颜色变化即可判读结果。全部检验流程仅需约13h（详细检验流程参见说明书）。
六、环凯恒温扩增试剂盒组成
七、环凯恒温扩增试剂盒操作指南
八、恒温扩增试剂盒产品列表
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食源性致病微生物检测系列 |
货号 |
规格 |
最低检验限 |
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沙门氏菌核酸检测试剂盒（恒温荧光法） |
KJD05L |
24tests |
14 CFU/Test |
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金黄色葡萄球菌核酸检测试剂盒（恒温荧光法） |
KJD04L |
24tests |
15 CFU/Test |
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志贺氏菌核酸检测试剂盒（恒温荧光法） |
KJD06L |
24tests |
6 CFU/Test |
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单核增生李斯特菌核酸检测试剂盒（恒温荧光法） |
KJD07L |
24tests |
8 CFU/Test |
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副溶血弧菌核酸检测试剂盒（恒温荧光法） |
KJD08L |
24tests |
4 CFU/Test |
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大肠杆菌O157：H7核酸检测试剂盒（恒温荧光法） |
KJD09L |
24tests |
29 CFU/Test |
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阪崎肠杆菌核酸检测试剂盒（恒温荧光法） |
KJD10L |
24tests |
23 CFU/Test |
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小肠结肠耶尔森氏菌核酸快速检测试剂盒（恒温荧光法） |
KJD11L |
24tests |
18 CFU/Test |
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水源性致病微生物检测系列 |
货号 |
规格 |
最低检验限 |
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铜绿假单胞菌核酸检测试剂盒（恒温荧光法） |
KJD01L |
24tests |
8 CFU/Test |
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粪肠球菌核酸检测试剂盒（恒温荧光法） |
KJD02L |
24tests |
9 CFU/Test |
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产气荚膜梭菌核酸检测试剂盒（恒温荧光法） |
KJD03L |
24tests |
11 CFU/Test |
九、恒温扩增快速检测所需配套增菌培养基列表
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检测项目 |
货号 |
品种名称 |
规格 | |
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铜绿假单胞菌 |
027047 |
铜绿假单胞菌增菌肉汤 |
250g/瓶 | |
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粪链球菌 |
028340 |
叠氮化钠葡萄糖液态培养基 |
250g/瓶 | |
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产气荚膜梭菌 |
027145 |
梭菌增菌培养基 |
250g/瓶 | |
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金黄色葡萄菌 |
024052 |
7.5%氯化钠胰酪胨大豆肉汤 |
250g/瓶 | |
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沙门氏菌 |
023030 |
四硫磺酸钠煌绿增菌液（TTB） |
250g/瓶 | |
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SR0040 |
TTB配套试剂 |
2×5支/盒 | ||
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志贺氏菌 |
023141 |
志贺氏菌增菌肉汤 |
250g/瓶 | |
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SR0380 |
志贺氏菌增菌肉汤配套试剂 |
10支/盒 | ||
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单增李斯特菌 |
026040 |
李氏增菌肉汤（LB1，LB2）基础 |
250g/瓶 | |
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SR0100 |
李氏增菌肉汤LB1配套试剂 |
2×5支/盒 | ||
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副溶血性弧菌 |
025015 |
3%氯化钠碱性蛋白胨水 |
250g/瓶 | |
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大肠杆菌0157：H7 |
028112 |
改良EC肉汤基础 |
250g/瓶 | |
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SR0030 |
改良EC肉汤配套试剂（新生霉素） |
10支/盒 | ||
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阪崎肠杆菌 |
022212 |
改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤基础（MLST） |
250g/瓶 | |
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SR0180 |
改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤配套试剂 |
10支/盒 | ||
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小肠结肠耶尔森氏菌 |
029905 |
改良磷酸盐缓冲液（PSB） |
250g/瓶 | |
十、恒温扩增快速检测需要配套的仪器及耗材列表
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所需的仪器 |
规格 |
备注 | |||
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侧边过滤样品均质袋（食品检测） |
容量400ml，袋子规格190*300mm |
固体食品样品处理时用于样品均值之用。采用过滤袋可显著减少样品残渣，利于微生物的分离及DNA的提取。 | |||
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无菌微孔滤膜 |
直径47mm,孔径0.22/0.45微米，400片/盒（无菌独立包装） |
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可调移液器 |
1-10 μL、10-200 μL和100-1000 μL各一把 |
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高速振荡样品前处理器 |
ShockMixer-1 均质频率93次/s，相比拍击均质器9次/s的均质频率，高速振荡样品前处理器能产生高频脉冲波，有更好的微生物释放率。 样品碎片少：样液澄清，易于取样、过滤，使用移液枪也不怕会堵塞枪头，利于微生物的分离及DNA的提取。 更少的破袋率、更广的样品适用性：无需打碎样品，不会导致样品处理袋的破裂，样品适用性更广，甚至可用于硬糖，压片药丸、鱼骨、核桃等质地坚硬的样品。 可预设均质时间（1-12分钟） |
固体食品样品均质之用。
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多联不锈钢过滤系统 |
快接设计，整机可拆卸，方便清洗消毒 专利产品：特殊的“三爪式”不锈钢滤膜扣具，不需要额外的夹具，便于单手操作和滤膜的取放，操作简单，使用效率更高。 滤器、滤器连接件、阀门、滤器支架、滤器上盖、滤膜支撑垫等主要配件均采用316优质不锈钢生产，不易损坏。 气液两用隔膜真空泵（直排泵），过滤后的液体直接通过泵，不需要真空贮液瓶，简化了过滤系统的配置，节省工作空间，操作更方便快捷 配置火焰灭菌器，灭菌更便捷。 |
用于水质样品过滤集菌。
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高速离心机 |
最高转速：16500 最大离心力(×g)：18780 最大容量：12×10ml 控制及驱动系统：交流变频电机，微机控制，直接驱动 |
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恒温金属浴 |
温度设定范围：0℃~100℃ 温度显示分辨率：0.1℃ 升温时间：≤8min（室温20℃~100℃） 降温时间：≤8min（100℃~4℃） 温控精度：≤±0.2℃ 温度波动度：≤±0.1℃ 温度均匀性：≤±0.5℃ 时间设定范围：0~99h59min 循环设置功能、程序段设置功能、自动记忆、QC报告打印 |
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