当微生物的存在首次在18世纪的显微镜下被发现时,很少有人可以想象他们在地球上无所不在。现如今,甚至可以毫不夸张的说,微生物在操纵整个世界。它们随处可见,包括在最恶劣,最荒凉的环境中,它们参与物理环境和有机生物圈的调节。微生物对人类健康和疾病的重要性在最近几十年也变得十分明显。
宏基因组学是当下广为认可的微生物组研究手段,对于宏基因组研究过程中建库及质控的关键一般大家都了然于心,而往往忽略了好的开始是成功的一半。那么在整个研究过程中样本制备环节有哪些关键成功要素?
有效的裂解对核酸产量和微生物多样性表现至关重要。经研究[1]发现,珠磨研磨裂解法可实现对不同特性样本的无差异化裂解,更适合于微生物组样本中核酸的彻底释放。PowerSoil Pro系列试剂盒,采用的PowerBead Pro tube裂解管包含合适粒径的氧化锆研磨珠,无惧难裂微生物,有效实现等效裂解。
困扰土壤样本DNA提取的另一大问题是其高含量的腐殖酸。腐殖酸与核酸一样都是大分子亲水性阴离子聚合物,很容易在最后步骤和核酸一起被抽提出来。PowerSoil Pro系列试剂盒采用升级抑制剂去除专利技术IRT (Inhibitor Removal Technology),无需在纯化过程中反复洗涤,室温操作混合后离心1分钟即可彻底去除所有PCR抑制剂。
熟悉QIAGEN的同学都知道上面提到的PowerSoil Pro系列试剂盒是Q家专为微生物组学研究开发的核酸提取明星产品。单个样本提取只需短短20分钟,获得的核酸相比其他提取方法在下游NGS结果中可获得更高的alpha diversity。美中不足的是,对于一次需要处理几十甚至上百样本时较为费时费力。
DNeasy 96 PowerSoil Pro Kit的适时出现恰好解决了这个问题。DNeasy 96 PowerSoil Pro Kit含96孔板式硅胶模离心柱,配合离心机或QIAvac96真空底座可以一次手工纯化高达96个堆肥,粘土,表层土壤及粪便和肠道样本。
作为PowerSoil Pro家族新成员,DNeasy 96 PowerSoil Pro Kit秉承了Pro家族一贯优点:PowerBead Pro Plate 裂解板一次可同时完成96个土壤或粪便样本的高效裂解,高通量的同时确保实现等效裂解,相比其他裂解方法可获得更高产量。
配备升级抑制剂去除专利技术IRT试剂,无需更换纯化柱也无需反复洗涤,加入专利试剂后混合离心1分钟彻底去除96个样本中的抑制剂。实验表明,该试剂盒纯化表现与DNeasy PowerSoil Pro Kit一致。
得益于对样本中所有微生物包括真菌的等效裂解以及PCR抑制剂彻底去除,经DNeasy 96 PowerSoil Pro Kit纯化所得NGS下游实验结果可获得更高的alpha diversity且符合真实微生物比例。
为庆祝PowerSoil Pro家族新成员的加入,即日起至10月30日,点击申请试用填写试用申请即有机会免费体验PowerSoil Pro系列试剂盒给您的微生物组学研究实验带来的革命性变化。
参考文献:
[1] Paul I Costea, Georg Zeller, et.al. Towards standards for human fecal sample processing in metagenomic studies. Nature Biotechnology volume 35 number 11 Nov. 2017
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