目的：建立黄曲霉毒素M1检测标准操作程序，并按规程进行检测，保证检测操作规范化。

范围：适用于所有用黄曲霉毒素测定的供试品。

责任：检验员、实验室负责人、实验室经理对本规程负责。

正文：

HPLC条件：

样品取样:真菌毒素分析的最大误差来源是样品的收集和取样过程，所以必需保证样品收集和取样具有代表性。

样品前处理：不同样品前处理有些不太相同，具体如下：

①　牛奶：水浴加热至40 oC；7000r离心15min，用上清液过柱净化；

②　乳粉和粉状婴幼儿配方食品：称取适量奶粉样品，用蒸馏水将其溶解，混合均匀使其充分溶解后，7000r离心15min，用上清液过柱净化；

③　发酵乳(包括固体状、半固体状和带果肉型)：称取适量奶粉样品，溶于蒸馏水中，混合均匀使其充分溶解，调节 PH值至微碱性，高速均质器匀浆，水浴加热后，离心，取上清液过柱净化；

④　干酪：称取适量切细或粉碎，过筛后加纯水溶解，高速均质器匀浆，超声提取后收集上清液，然后用石油醚进行两次萃取，然后用适宜的有机溶液萃取，取若干上清液过柱净化；

⑤　奶粉：用蒸馏水溶解，混合均匀使其充分溶解，调节PH值至微碱性，水浴加热后，离心，取上清液过柱净化；

⑥　奶油：称取适量加甲醇水溶解，震荡后使用分液漏斗取下层溶液，蒸干后复溶于水，用于过柱净化。

免疫柱净化步骤：

┅┅取出免疫亲和层析柱, 恢复至室温，将上方塞子取出斜剪断，再插回亲和柱上。

┅┅将免疫亲和柱连接于玻璃注射器下。准确移取清澈液注入玻璃注射器；

┅┅将空气压力泵与玻璃注射器连接，调节压力使溶液以约1-2mL/min流速缓慢通过免疫亲和柱，直至2~3mL空气通过柱体；

┅┅更换玻璃注射器与亲和柱连接，在注射器中加入10ml水，调节压力使水以约6mL/min流速清洗亲和柱。

┅┅准确加入4mL色谱级乙腈洗脱，流速为1 mL/min ~2mL/min，收集全部洗脱液于玻璃试管中，供检测。

注：洗脱后的待测样品最好用和缓的氮气在30 ℃下将洗脱液蒸发至体积为50～500 μL；收集管中的洗脱液即为纯化后的样品，可直接用ELISA,荧光和高效液相等方法检测。

HPLC 检测需要仪器与耗材

以上方案由北京安美生医药科技有限公司检测应用实验室编制，最终解释权归安美生医药科技有限公司所有。

技术咨询请联系北京安美生医药科技有限公司技术部。

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以上方案由北京安美生医药科技有限公司检测应用实验室编制，最终解释权归安美生医药科技有限公司所有。

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