一、IP-ELISA联合方法原理及流程：

方法原理及流程说明：
1） 从实验组和对照组的细胞中分别取400ug粗蛋白，每组用10微升抗乙酰化抗体琼脂糖填料(ICP0388)富集（IP）。
2） 结合于琼脂糖填料上的乙酰化蛋白每次用100uL   0.1 mol/L HCl，洗脱两次。
3） 将洗脱液汇集在一起，用饱和碳酸钠调节pH值至中性。
4） 然后取洗脱液100uL/孔包被于酶标板上，重复包被两孔，在室温下培养过夜。
5） 第二天用PBSt清洗板孔2次，用0.1%BSA inPBSt封闭板孔，孵育30分钟，再用PBSt洗涤三次。
5） 在37℃下添加HRP标记的抗乙酰化抗体（ICP0381）用0.1%BSA in PBSt稀释到0.25 ug/Ml,孵育30分钟。
6） 用PBSt清洗板孔4次，每孔加100uL  TMB，培养30分钟显色。
7）每孔10 uL 2 mol/L 硫酸终止显色。在450 nm处读取吸光度（OD）。
8） 通过OD（处理）/OD（未处理）计算反应性乙酰化蛋白水平。

 实例1：分析用不同浓度的TSA处理12小时的细胞中的总乙酰化蛋白水平。即先用抗AcK琼脂糖填料（ICP038）富集IP,再以ELISA方法用HRP标记的抗乙酰化抗体（ICP0381）做检测不同浓度TSA处理的细胞中，快速检测出其蛋白质乙酰化增加达10倍。
 

实例2：分别用HDAC抑制剂TSA处理5和15小时后，对MMRU细胞样品中的乙酰化蛋白质进行Western blot分析。即样品先用抗乙酰化赖氨酸琼脂糖填料（ICP0388）亲和富集（IP），再用WB方法，加入HRP标记的抗乙酰化抗体（ICP0381）进行检测，快速得到高确定性的WB结果。
三、快速检测乙酰化蛋白所用到的相关抗体试剂