His重组蛋白免疫亲和纯化富集填料

His作为蛋白纯化时的首选标签，其优势在于：1. N-端的His与细菌的转录翻译机制兼容，有利于蛋白表达；2. His对目的蛋白本身特性几乎没有影响，不会改变目的蛋白本身的可溶性和生物学功能；3. His非常小，在融合蛋白结晶后对蛋白的结构没有影响；His的免疫原性相对较低，可将纯化的蛋白直接注射入动物体内进行免疫并制备抗体；

纯化His融合蛋白目前通用做法是用镍柱亲和纯化，但用镍柱纯化会有蛋白不溶解，蛋白不挂柱、蛋白难洗脱、电泳杂带多、特异性差、金属镍离子容易脱落漏出混入蛋白溶液，不但会通过氧化破坏目的蛋白的氨基酸侧链，而且柱子也会非特异吸附蛋白质等问题。

ImmuneChem品牌His-tag Antibody, Agarose优势在于：

1. 抗His标签抗体通过共价键定向稳定偶联到琼脂糖珠上，抗体偶联牢固；
2. 利用抗原抗体高度专一特异性结合力，一次过柱即可获得纯度高于95%的His-Tag蛋白。
3. 只特异纯化出His-Tag，免受有杂蛋白之苦；
4. 可对His-Tag蛋白富集、浓缩。
5. 纯化过程简便易操作。                                                                                         使用His-tag Antibody, Agarose（货号ICP1310）纯化富集His-Tag蛋白WB效果。

   使用方法、步骤：

   1. 取Anti-His Agarose 100uL装柱，用0.5ml 0.05mol/mL M HCl洗填料，再PBSt洗至中性；

   2.  取His-Tag重组细菌裂解液离心取上清，用蒸馏水稀释5倍，上柱；

   3.  依次用3mL PBSt，3mL蒸馏水洗填料，再300uL 0.05mol/mL HCl in PBSt溶液洗脱，收集300uL洗脱液，10uL饱和碳酸钠中和，待测。

   4.  洗脱液用ELISA法检测；

   5.  洗脱液用WB法检测：取同体积的His-Tag重组细菌裂解液、His-Tag重组细菌裂解液滤过液及洗脱液各加入1/4的5*loading buffer，煮沸5分钟，离心上样电泳进行WB检测。