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基因枪应用技术问答解疑

2020-04-13     来源:本站     点击次数:2131


1. 基因枪转化法对受体有啥要求?
基因枪对动物:任何可暴露于基因枪口外的组织(皮肤、器官)细胞、外植体和器官培养;

植物:田间和温室使用、植物培养细胞和外植体;
酵母、细菌、其它微生物细胞器、叶绿体、线粒体;
受体广泛。

2. 基因枪(颗粒轰击法)相比传统的转化那些优势?
简单快速功能灵活,各类细胞类型通用
只需要少量的DNA和细胞
能进行多质粒共同导入
能输送大片段DNA
没有无光的基因或蛋白被转导

3. 基因枪都应用哪些方面比较多?
基因表达研究、基因治疗、遗传免疫、神经细胞染料标记、遗传育种

4. 基因枪转化过程中气源对人体是否有伤害?
基因枪转化过程中使用的气源一般是纯度比较高的氮气或者氦气,氮气占空气的74% 完全无害= = 氦气稀有气体,比氮气更稳定,不发生化学反应(除了物理方法)

5. 作为转化的动力源氮气和氦气哪个更好?
氢气易燃易爆 氧气助燃且可能影响宿主 ,氦气是惰性气体,动力强劲较适合用于转基因
另外氮气也可以的。

6. 基因枪法可以得到永久转基因植株吗?
基因枪法注入基因后,该植物原则上一直都是转基因植物,无性繁殖的后代也一直是转基因植物,而其种子繁殖的下一代则不一定,有可能种子繁殖的下一代含有目标基因,也可能没有。

7. 影响基因枪转化的因素?
首先是气源的压力大小,以及射击距离,实验证明轰击次数太多也会造成对细胞的伤害,因此一般以2-3次为宜。

8. 子弹制备过程中标配的金粉一瓶能打多少次?
一瓶标配的金粉是250mg,每枪金粉含量为0.5mg,理论值是可以打500枪左右

9. 子弹制备过程中标配的亚精胺,CaCl2 都什么品牌的比较好?
亚精胺选择sigama的就行,CaCl2   选择国药的就行

10. 子弹制备过程中需要准确称取金粉吗?这么小的重量如何保证准确性?
在沉淀的金粉中加入4ml 50%的甘油或者超纯水制作成母液,这样100μl悬浮液于离心管中(此管可打12枪,根据实验样品多少预先分几个小管),根据实际需求取液体,这样保证了重量的准确性

11. 子弹制备过程中金粉如何灭菌?
制作成的母液直接全自动高压灭菌锅灭菌即可,千万注意冲盖,以免造成损失

12. 子弹制备过程中金粉母液如何保存?
制作成的母液直接4度冰箱保存即可,最多可以存放2年左右

13. 基因枪转化的效率大概为多少?瞬时表达需要打多少枪才可能出效果?
遗传育种的转化效率大概是10-3,瞬时表达大概每个样品打2-3枪,每个样品打三个重复即可

14. 制作好的母液,再下次取的时候怎么保证均匀?
直接旋涡振荡器,然后超声波清洗机,这样再取母液之前样品均一,保证了实验的准确性。

15. 载体DNA纯度越高,转化效果越好,如何保证浓度呢?
DNA纯度越高,转化效果越好,但转化频率并不与DNA的浓度成正比,相反,DNA的终浓度过高会与微弹形成大的凝结,反而降低了转化频率,目前普遍采用DNA 浓度为1μg/μl,但是一般试剂盒提取浓度为400ng/ul左右,因此要么选择浓缩,要么选择手提为宜。

16. 手提基因枪和台式基因枪应用范围有啥区别?
手提基因枪主要应用于活体或者户外植物以及需要贴壁轰击的受体,台式主要适用于组织,或者外植体以及细胞器、叶绿体、线粒体。原理没有啥区别主要是受体选择上,原则上可以通用

17. 金粉或者钨粉一般选用直径是多少?
金粉或钨粉.(植物细胞选用1.0μm,大部分动物细胞用1.6-1.7μm,微生物一般用0.6μm)。钨粉是可以进行试验的,只是要在3-4天内用完制作好的子弹,容易氧化抱团。

18. 子弹制备仪的作用?
子弹制备仪其实是一个自动旋转的吹气装置,主要作用是把液体里面的金粉均匀铺盖在子弹管上面,如果需要制作大量子弹时候,子弹制备仪的优势就出来了

19. 子弹制备仪试用注意事项是什么?
子弹制备仪最大的注意事项就是在吹气之前,钢瓶的压力要调到0.1MPa以下,太大了容易爆破子弹制备仪的软管。

20. 如果做瞬时表达只需要做几个子弹怎么办?
选择手动制作,直接用移液器加样与子弹枪孔中,360度旋转加入,防止流出,然后树立与超净台中,打开最小档位的风吹5分钟左右,具体时间看金粉挂壁情况。
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