偶联反应后，通常将封闭剂（通过吸附）包被在微球上。这些化合物用于使包被的微球与样品中的非目标分子之间的非特异性相互作用（例如蛋白质与聚合物表面之间的疏水相互作用）最小化。应当仔细选择封闭剂，以确保其有效地减少非特异性相互作用；某些阻断剂可能会干扰测试/测定，或实际上有助于非特异性结合。应该评估阻断剂的浓度，以确保充分的阻断（尤其是根据捕获分子的包被水平），而又没有明显的活性损失。阻断剂通常以不同的量添加到存储缓冲液中，标准浓度为0.05％至0.1％（w / v）。在储存之前，也建议在较高浓度的阻断剂（最高1％）中单独孵育，以使微球暴露的表面饱和。一些常用的阻断剂包括：
a. BSA（牛血清白蛋白）：通常单独使用，但可以与其他阻断剂（最常见的是表面活性剂）组合使用。
b. 酪蛋白：一种牛奶蛋白，含有天然生物素，在与涉及生物素的系统一起使用时应避免使用，以防止干扰。
c. 消化酶（酪蛋白酶水解产物）：酪蛋白的酶衍生物，在与涉及生物素的系统一起使用时，也应避免使用。
d. 非离子表面活性剂：典型为Tween®20和Triton™X-100。 与其他阻断剂组合使用时，常见比例为1％阻断剂； 0.05％表面活性剂。
e. “无关” IgG：通常在将特异性IgG与微球结合时使用。 例如，如果偶联小鼠IgG，则兔子（或任何非交叉反应的IgG）可以被吸附为阻断剂。
f. FSG（鱼皮明胶）：也可以使用纯明胶或明胶水解产物。
g. PEG（聚乙二醇）：一种非常通用的阻断剂，有多种尺寸（分子量，链长），构型和电荷可供选择。
h. 血清：非交叉反应的血清，例如马或鱼的血清，在与各种类型抗体的交叉反应方面是高度惰性的。
i. 商业阻断剂：许多公司提供的制剂是两种或多种分子量不同的单一阻断剂的混合物，可在各种条件下有效使用。
还有许多其他的阻断剂，我们建议尝试各种组合和浓度。