一、紫外荧光成像 (UV imaging)对于蛋白结构晶体学的研究,在晶体衍射获得结构之前适当地鉴别蛋白晶体还是盐晶,能减少蛋白用量、降低成本和提高效率,是蛋白结晶筛选的重要环节。一般可通过普通光学或偏光显微镜直接观察鉴别,而一些有经验的科学家还可以从晶体形貌如颜色和对称性从而进行区分。
形态颜色各异的蛋白晶体
此外,通过紫外荧光成像来观察荧光照片,根据荧光强弱判断蛋白晶体是另一个常用手段,其相比于普通光学/偏振光显微镜,更为准确、快速和直观。紫外成像简单蛋白晶体的原理非常简单,通常蛋白晶体都会含有色氨酸,酪氨酸或苯丙氨酸这三种氨基酸的一种或多种,在200-300 nm波长范围的激发光下,可发出250-400 nm的紫外荧光,因此可通过有无荧光或荧光的强弱来判断。
色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸的激发和发射光谱
来自
美国Jansi公司的蛋白结晶紫外荧光成像系统UVEX 系列,是专门为
蛋白晶体紫外荧光成像和分析所设计,通过优化紫外光路系统配合高性能的冷紫外CCD,可显著提高紫外荧光成像的灵敏度,更好地区别蛋白晶体和盐晶。
二、功能和特色1. 标配紫外荧光成像Jansi公司专门为紫外成像优化的光路系统同时配合高级600万像素冷紫外CCD相机,可同时检测到色氨酸(Trp)、酪氨酸(Tyr)或苯丙氨酸(Phe)的紫外荧光现象。
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冷CCD ; 工作温度:0℃ 以下 |
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明场 |
紫外荧光 |
2. 具有紫外吸收功能, 鉴定核酸晶体芳香族氨基酸(苯丙氨酸,酪氨酸和色氨酸)有苯环,上有共轭双键,在对280 nm紫外可见光有最大吸收作用。Jansi配备独有的紫外吸收模块(UV Absorbance),解决紫外荧光不能解决的问题:
1) 某些情况如DNA/化合物 complex结合,导致荧光淬灭;
2)鉴定核酸(DNA)晶体
3. 具备自动聚焦和多层扫描功能Jansi可选择5x、10x、15x、20x和40x 固定镜头,可进行自动聚焦,选择最佳焦平面。同时,对晶体在纵向的不同聚焦点上可完成多次成像,选择不同层面的最佳聚焦点以拼合成一张最清晰的图片。
4. 自动中心定位(Dropcentering)对于LCP实验,晶体通常不在孔最中央,Jansi软件可找到晶体所处位置,并自动进行中心定位,以完成最佳的成像效果和后续分析。
自动中心定位功能
三、可选配板库,最多可存放860块low profile板JANSI UVEX系列可配备叠板架,p-640型号内部可最多存放860块SBS low profile晶体板或1060块LCP板,板架温度可控制在4-20 ℃, 具备带条形码晶体板自动扫描识别功能,同时可满足至少4000个标签的打印。
UVEX-P256系列
直观的板库软件,内部使用和运作情况一目了然
四、写在最后Jansi UVEX-p系列是为快速和准确区分蛋白晶体和盐晶所设计的紫外荧光成像系统,其专门为紫外成像所优化的光路配合冷CCD,使其具备高灵敏度的紫外荧光成像能力。
Jansi可以在4分钟内完成96孔晶体板的成像,可以和Marco整合对晶体自动AI评分,可测量晶体的长度,配合自动聚焦和多层扫描(EFI)功能,获得最清晰的明场和紫外荧光图片,助力蛋白晶体研究。
UVEX-P 系列