bv-2细胞（货号ZQ0397）
 

Bv-2细胞培养细节

培养条件：

MEM（货号：ZQ-300）+10%FBS（货号：ZQ0500）+1%P/S（货号：CSP006）+1%Sodium Pyruvate 100 mM Solution（货号：CSP003）

中乔培养过程种添加丙酮酸钠是因为丙酮酸钠作为细胞能量来源，在细胞培养基中起到替代碳源的作用，参与细胞营养代谢，维持细胞的生长速度和状态。
 

丙酮酸钠（货号：CSP003）
 

传代比例：1:3-1:6，每2-3天换液一次

传代步骤：

由于bv-2是半悬浮细胞，因此在如图所示密度 80%-90%时，即可进行传代分瓶。

当漂浮的悬浮细胞和圆润细胞比较多时，建议先用吸管轻柔吹打4-6下收集悬浮细胞。当漂浮圆润细胞少时，则弃去培养上清，用PBS轻柔洗细胞1-2次。

加1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培养箱中消化 1-2 分钟，然后用手掌心拍打瓶尾后，在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。（T25培养瓶建议添加3ml终止液）。

1:3-1:6轻轻打匀后吸出细胞悬液，在800-1000RPM条件下离心4-5分钟， 弃去上清液，用手指波动离心管弹松细胞沉淀。

补加1-2ml培养液后进行1:3-1:6分瓶。再添加新鲜培养基进行培养。（t25培养瓶建议添加5-7ml完全培养基。

冻存条件：无血清冻存液（液氮保存）
 

无血清细胞冻存液（货号：CSP04)
 

Bv-2细胞培养问题

1、生长缓慢：

1.bv-2细胞增值速度很快，倍增时间约为25-35h，当发现生长缓慢时排除污染的可能性，比如真菌污染，细菌污染，支原体污染等因素。

2.适当提高一点血清含量，及补充丙酮酸钠。

2、悬浮细胞变多？

1.Bv-2对培养基酸碱度比较敏感。PH偏碱时候，培养基呈紫红色。在偏碱培养基中培养数小时后将会全部飘起。

2.由于bv-2生长速度快，1：3传代后，48h后就需要换液，否则细胞密度过大，营养成分减少，容易出现大量细胞漂浮的情况，及时换液即可。

3、细胞容易聚团？

1.BV2是一种半贴壁半悬浮细胞，它的形态并不规则，存在圆形和梭形两种。当圆形细胞聚成团块处于贴壁细胞上和培养基里时，说明细胞处于快速增值分裂的生长状态，及时传代处理即可。

4、贴壁细胞很瘦小？

1.Bv-2细胞出现瘦小、拉丝、不增值等情况时，可能是细胞存在微生物污染，刺激后自行分化、血清营养价值不高，消化传代过度导致细胞膜损伤等情况导致细胞很瘦小。

2.建议排查污染源，更换血清，分化后的细胞贴壁更牢，极难消化，因此应尽量缩短消化时间，预防细胞分化，重新复苏新种子。

5.静息与激活状态下分别是什么样子？

1.受到刺激的小胶质细胞突起缩短变厚，胞体增大，呈现阿米巴样

2.非激活状态有触角，LPS激活后触角逐渐消失（激活BV2细胞形态有点像小眼睛）

3.静息状态下的细胞是成梭形有伪足的，受到刺激的bv-2突起缩短变厚，胞体增大，呈现阿米巴样。

4.MEM基础培养基（货号：ZQ-300）
 

MEM基础培养基（货号：ZQ-300)