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⼈肾⽪质近曲⼩管上⽪细胞(HK-2)培养要点

2024-10-18     来源:本站     点击次数:439

HK-2细胞属源于正常肾的近曲小管细胞,通过导入HPV-16 E6/E7基因而获得永生化。将含有HPV-16 E6/E7基因的重组的逆转录病毒载体pLXSN 16 E6/E7转染外生包装细胞Psi-2;Psi-2细胞产生的病毒再去感染兼嗜性包装细胞系PA317,最后将PA317细胞产生的病毒颗粒导入正常的肾皮质近曲小管细胞。尽管pLXSN 16 E6/E7中含有新霉素抗性,但未用G418筛选转导克隆。Southern和FISH分析显示,HK-2细胞来源于单克隆。PCR检测证实,HK-2细胞基因组中含有E6/E7基因。

细胞名称:
人肾皮质近曲小管上皮细胞(STR鉴定正确)

细胞简称
HK-2

产品货号TCH-C400

种属来源

组织来源

细胞形态上皮细胞样

生长特性贴壁生长

培养体系MEM+10% FBS+1% P/S

配套培养基货号:TCH-G400

传代比例:1:3-1:4,每2-3天换液一次

传代周期:24-48 h

培养条件:气相:95%空气+5%CO2,温度:37℃

冻存条件:60%基础培养基+30%FBS+10%DMSO,液氮储存

质量检测:细菌、真菌、支原体检测均为阴性

 

1. 出现空泡
空泡问题需要结合⽣⻓速度和形态来看:如果⽣⻓速度和形态正常,空泡可能是正常的细胞活动,传代后空泡即可减轻。
如果⽣⻓较慢,形态异常,空泡可能是⾃噬⾏为,可加⼤⾎清⽐例(不超过20%)或更换⾎清品牌改善细胞状态。

2. 出现拉丝
细胞伸出细⻓的丝有两种情况:
第⼀种:细胞迁移造成的,细胞在培养⽫上并不是静态的,也会出现迁移。迁移时细胞的⼀部分滞留在原处,迁移的过程中会拉出⼀条细⻓的丝。这种情况下拉丝的细胞占少数,细胞整体的⽣⻓状态是正常的,不⽤特殊处理。
第⼆种:细胞营养不良,拉丝的细胞占⼤多数,同时细胞⽣⻓缓慢,此时可以提⾼⾎清⽐例(不超过20%)或添加5 ng/mL EGF。

3. 形态不对
正常的HK-2呈铺路⽯状⽣⻓,如果细胞呈镰⼑状或不规则状,可能是因为培养环境发⽣了较⼤的改变,⽐如从有⾎清到⽆⾎清的转换,此时换回原来的培养条件细胞可逐渐恢复;如果细胞变得细⻓,这时候可能是营养不良。

4. ⽣⻓缓慢
在标准培养条件(MEM+10%FBS+1%PS),以及1:3传代条件下,HK-2的传代周期约为3天;
当细胞⽣⻓缓慢,⼀周⽆法传代时,需要考虑培养基特别是⾎清是否合适;选择合适的培养基及⾎清,同时加⼤细胞接种密度可以改善;
⾎清质量差异可能引起细胞状态变化,建议选⽤⾼质量的胎⽜⾎清。
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