srCas12a工具酶助力鸭坦布苏病毒（DTMUV）快速诊断
2025-03-14 来源:本站 点击次数:398鸭坦布苏病毒（DTMUV）是一种新兴的黄病毒，给中国禽类产业带来了重大经济损失。快速准确检测 DTMUV 对于有效防控措施至关重要。来自福建农林大学动物科学学院的研究团队在《Animals》期刊发表了一种新型的现场检测 DTMUV 的技术，其主要策略是将逆转录环介导等温扩增（RT-LAMP）与 CRISPR/Cas12a 系统相结合。
研究发现，该技术可在 100 分钟内灵敏特异地检测含 DTMUV NS3 基因，最低检测限为 19.3 拷贝 / 微升。该团队成功将 RT-LAMP-CRISPR/Cas12a 检测方法应用于 8 个鸭胚和 11 个鸡胚成纤维细胞样本的 DTMUV 诊断，检测结果与 RT-qPCR 结果一致。值得一提的是，该研究中使用的工具酶srCas12a-18来自武汉尚睿生物科技有限公司，货号为Cat No. SRB-CAS-001。研究表明，RT-LAMP-CRISPR/srCas12a-18 检测方法可靠、灵敏、特异且用户友好，有望用于 DTMUV 临床样本的早期现场检测，便于及时干预和改善禽类产业疾病管理。
RT-LAMP-CRISPR/srCas12a-18 介导的鸭坦布苏病毒快速可视化检测技术
主要结果：
（1）RT-LAMP-CRISPR/Cas12a 检测方法的建立：研究团队成功开发了一种用于检测鸭坦布苏病毒（DTMUV）的 RT-LAMP-CRISPR/srCas12a-18 快速可视化检测方法。该方法包括 RNA 快速提取、RT-LAMP 扩增、Cas12a 酶切反应以及荧光检测，整个流程仅需约 100 分钟。
（2）引物和 crRNA 的筛选：研究人员筛选出针对 DTMUV 高度保守的 NS3 基因的高效引物对和 crRNA，其中 NS3-crRNA-2 在不同 DTMUV 菌株中具有高度保守性，被选为检测用 crRNA。
（3）检测灵敏度评估：通过梯度稀释含 DTMUV NS3 基因的克隆质粒，确定 RT-LAMP 扩增的检测下限为 19.3 拷贝，RT-LAMP-CRISPR/srCas12a-18 检测方法的灵敏度也达到 19.3 总拷贝，表明该方法具有高灵敏度。
（4）检测特异性评估：使用含有 MDRV σC 基因的合成质粒作为对照，结果显示该方法对 DTMUV 具有严格的特异性，无交叉反应。
（5）临床样本检测验证：对 8 个鸭胚和 11 个鸡胚成纤维细胞样本进行检测，结果与 RT-qPCR 方法完全一致，准确率达到 100%，且该方法成本更低、操作更简便，适合现场使用。
参考文献：
Chen J, Tao D, Yang F, Pan C, Bao X, Xie S, Gong P, Zhao C, Lin R. Development of a Rapid Visual Detection Assay for Duck Tembusu Virus Using RT-LAMP-CRISPR/Cas12a. Animals 2024, 14(23), 3439; https://doi.org/10.3390/ani14233439
尚睿生物简介：
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