ELISA实验标本保存技术解读
2025-06-18 来源:本站 点击次数:10
ELISA酶联免疫吸附实验免疫分析是一种利用特定抗体与抗原或半抗原发生的高选择性高特异性识别和结合原理，对待测抗体或者抗原进行分析测定的方法，酶联免疫吸附分析（下称ELISA）是免疫分析的一种，分三个部分组成：免疫识别，信号输出和数据处理。在进行ELISA实验时，保存标本是确保实验结果准确性的关键步骤。以下是一些关于如何保存ELISA实验标本的建议：
1. 短期保存：如果标本在一周内需要进行检测，可以将它们保存在2-8°C的环境中。这个温度范围可以抑制微生物生长，同时保持标本的稳定性。
2. 长期保存：对于需要保存超过一周的标本，应根据保存时间和预期使用的抗原或抗体稳定性选择合适的保存温度。例如：
-20°C：适用于短期内保存（大约1个月），但要注意避免反复冻融，因为这可能影响蛋白质的稳定性。
-80°C：对于需要长期保存（6个月或更长时间）的标本，建议使用-80°C的冷冻条件。这也减少了反复冻融对样本的影响。
3. 分装冻存：为了减少每次实验时的取样误差，以及避免样本的浪费，建议将标本按一次实验所需的量分装保存。这样可以确保每次实验使用新鲜的样本，减少因反复冻融导致的蛋白效价下降。
4. 避免溶血：在采集血清或血浆时，应避免溶血，因为红细胞破裂会释放具有过氧化物酶活性的物质，可能增加非特异性显色，影响ELISA的结果。
5. 抗凝剂的选择：对于血浆样本，选择合适的抗凝剂非常重要。常用的抗凝剂包括EDTA、肝素和枸橼酸钠。抗凝剂的选择应根据待检测物质的性质和实验要求来决定。
6. 样本稳定性：在保存标本时，还应考虑待检测物质的稳定性。某些物质在特定条件下可能不稳定，需要添加保护剂或在特定条件下保存。
7. 尿液样本：尿液样本应正确收集并立即处理，避免污染。如果不能立即检测，应尽快离心去除细胞和沉淀，并在适当的温度下保存。
8. 细胞和组织样本：细胞和组织样本在处理后应立即进行匀浆或裂解，并在低温下快速离心收集上清。细胞裂解液可能需要在-80°C保存，并避免反复冻融。
9. 避免污染：在处理和保存标本时，应严格遵守无菌操作，避免微生物污染，因为污染可能导致假阳性结果。
10. 文献预实验：在保存和处理标本之前，建议查阅相关文献并进行预实验，以确定待检测物质的最佳保存条件和稀释比例。
通过遵循这些保存和处理标本的建议，可以最大限度地保证ELISA实验结果的准确性和可靠性。
ELISA实验在标本保存时常出现溶血、凝集不全、受细菌污染等现象发生，下面详述应对策略:
一、标本保存不当
在冰箱中保存过久的标本，血清中IgG可聚合成多聚体、AFP可形成二聚体，在间接法ELISA测定中会导致本底过深、甚至造成假阳性；标本放置时间过长（如一天以上），有时抗原或抗体免疫活性减弱，亦可出现假阴性。为克服上述干扰，ELISA测定的血清标本宜为新鲜采集；如不能立即测定，5天内测定的血清标本可存放于4℃，1周后测定的血清标本应低温冻存；冻存后融解的标本，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混合后再测定，但混匀时应轻柔，不可强烈振荡。
二、标本溶血
由于各种人为原因引起的标本溶血，均可因红细胞破坏溶解时释放出大量具有过氧化物酶活性的血红蛋白，在以辣根过氧化物酶为标记的ELISA测定中，会导致非特异性显色，ELISA试剂盒干扰测定结果。为克服上述干扰作用，标本采集时必须注意避免溶血。
三、标本凝集不全
在没有促凝剂和抗凝剂存在的情况下，正常血液采集后1/2~2h开始凝固，18~24h完全凝固。临床检验工作中，有时为了争取时间快速检测，常在血液还未开始凝固时即强行离心分离血清，此时的血清中仍残留部分纤维蛋白原，在ELISA测定过程中可以形成肉眼可见的纤维蛋白块，易造成假阳性结果；这类情况于次日复查时因血凝已完全，血清中不再有纤维蛋白原存在，故复查结果变为阴性。为避免上述干扰作用，解决的办法最好是血液标本采集后必须使其充分凝固后再分离血清，或标本采集时用带分离胶的采血管或于采血管中加入适当的促凝剂。
四、标本管中添加物质的影响
抗凝剂、酶抑制剂及快速分离血清的分离胶等均对ELISA测定有一定干扰作用。
五、标本受细菌污染
因菌体中可能含有内源性辣根过氧化物酶，因此，被细菌污染的标本同溶血标本一样，亦可产生非特异性显色而干扰测定结果。
做好了ELISA试剂盒因素和操作因素之后，确保检测结果的准确性就容易的多了。
1. 短期保存：如果标本在一周内需要进行检测，可以将它们保存在2-8°C的环境中。这个温度范围可以抑制微生物生长，同时保持标本的稳定性。
2. 长期保存：对于需要保存超过一周的标本，应根据保存时间和预期使用的抗原或抗体稳定性选择合适的保存温度。例如：
-20°C：适用于短期内保存（大约1个月），但要注意避免反复冻融，因为这可能影响蛋白质的稳定性。
-80°C：对于需要长期保存（6个月或更长时间）的标本，建议使用-80°C的冷冻条件。这也减少了反复冻融对样本的影响。
3. 分装冻存：为了减少每次实验时的取样误差，以及避免样本的浪费，建议将标本按一次实验所需的量分装保存。这样可以确保每次实验使用新鲜的样本，减少因反复冻融导致的蛋白效价下降。
4. 避免溶血：在采集血清或血浆时，应避免溶血，因为红细胞破裂会释放具有过氧化物酶活性的物质，可能增加非特异性显色，影响ELISA的结果。
5. 抗凝剂的选择：对于血浆样本，选择合适的抗凝剂非常重要。常用的抗凝剂包括EDTA、肝素和枸橼酸钠。抗凝剂的选择应根据待检测物质的性质和实验要求来决定。
6. 样本稳定性：在保存标本时，还应考虑待检测物质的稳定性。某些物质在特定条件下可能不稳定，需要添加保护剂或在特定条件下保存。
7. 尿液样本：尿液样本应正确收集并立即处理，避免污染。如果不能立即检测，应尽快离心去除细胞和沉淀，并在适当的温度下保存。
8. 细胞和组织样本：细胞和组织样本在处理后应立即进行匀浆或裂解，并在低温下快速离心收集上清。细胞裂解液可能需要在-80°C保存，并避免反复冻融。
9. 避免污染：在处理和保存标本时，应严格遵守无菌操作，避免微生物污染，因为污染可能导致假阳性结果。
10. 文献预实验：在保存和处理标本之前，建议查阅相关文献并进行预实验，以确定待检测物质的最佳保存条件和稀释比例。
通过遵循这些保存和处理标本的建议，可以最大限度地保证ELISA实验结果的准确性和可靠性。
ELISA实验在标本保存时常出现溶血、凝集不全、受细菌污染等现象发生，下面详述应对策略:
一、标本保存不当
在冰箱中保存过久的标本，血清中IgG可聚合成多聚体、AFP可形成二聚体，在间接法ELISA测定中会导致本底过深、甚至造成假阳性；标本放置时间过长（如一天以上），有时抗原或抗体免疫活性减弱，亦可出现假阴性。为克服上述干扰，ELISA测定的血清标本宜为新鲜采集；如不能立即测定，5天内测定的血清标本可存放于4℃，1周后测定的血清标本应低温冻存；冻存后融解的标本，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混合后再测定，但混匀时应轻柔，不可强烈振荡。
二、标本溶血
由于各种人为原因引起的标本溶血，均可因红细胞破坏溶解时释放出大量具有过氧化物酶活性的血红蛋白，在以辣根过氧化物酶为标记的ELISA测定中，会导致非特异性显色，ELISA试剂盒干扰测定结果。为克服上述干扰作用，标本采集时必须注意避免溶血。
三、标本凝集不全
在没有促凝剂和抗凝剂存在的情况下，正常血液采集后1/2~2h开始凝固，18~24h完全凝固。临床检验工作中，有时为了争取时间快速检测，常在血液还未开始凝固时即强行离心分离血清，此时的血清中仍残留部分纤维蛋白原，在ELISA测定过程中可以形成肉眼可见的纤维蛋白块，易造成假阳性结果；这类情况于次日复查时因血凝已完全，血清中不再有纤维蛋白原存在，故复查结果变为阴性。为避免上述干扰作用，解决的办法最好是血液标本采集后必须使其充分凝固后再分离血清，或标本采集时用带分离胶的采血管或于采血管中加入适当的促凝剂。
四、标本管中添加物质的影响
抗凝剂、酶抑制剂及快速分离血清的分离胶等均对ELISA测定有一定干扰作用。
五、标本受细菌污染
因菌体中可能含有内源性辣根过氧化物酶，因此，被细菌污染的标本同溶血标本一样，亦可产生非特异性显色而干扰测定结果。
做好了ELISA试剂盒因素和操作因素之后，确保检测结果的准确性就容易的多了。
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