人结肠平滑肌细胞培养试剂盒流程关键点
2025-06-27 来源:本站 点击次数:13人结肠平滑肌细胞的体外培养是研究胃肠动力障碍、炎症性肠病及肿瘤微环境的重要工具。该试剂盒通过优化培养基组分与细胞外基质配方，解决了原代细胞培养中常见的增殖缓慢、表型丢失等问题。
试剂盒核心组分解析
1. 选择性培养基：含5%胎牛血清的基础培养基中，添加了TGF-β1（2 ng/mL）和肝细胞生长因子（HGF），可抑制成纤维细胞过度生长，同时维持平滑肌细胞收缩蛋白（如α-SMA、calponin）的表达。
2. 基质胶预处理板：采用低生长因子Matrigel（稀释度1:30）包被培养皿，既能促进细胞贴附，又可避免过度分化。用户需注意解冻后分装保存，防止反复冻融导致层粘连蛋白降解。
3. 冻存复苏添加剂：含10% DMSO的特定保护剂中混有ROCK抑制剂（Y-27632），可将复苏存活率从常规方法的40%提升至85%以上。
操作流程关键点
1. 原代分离阶段：组织块贴壁法需严格控制胶原酶IV消化时间（建议15分钟间歇振荡），避免肌纤维断裂。离心后建议用40 μm细胞筛过滤，去除未消化的黏膜碎片。
2. 传代时机判断：当细胞密度达80%融合时，用含0.05%胰蛋白酶-EDTA溶液处理3分钟，立即加入含血清中和液。值得注意的是，第3代后细胞增殖能力显著下降，建议冻存备用。
3. 功能验证实验：推荐通过钙离子荧光标记（如Fluo-4 AM）检测乙酰胆碱刺激下的钙瞬变，或采用收缩力测定仪分析细胞对卡巴胆碱的剂量反应曲线。
应用场景拓展
最新研究发现，该试剂盒培养的细胞可用于构建3D肠道类器官共培养模型。例如，与肠神经元共培养时，通过添加胶质细胞源性神经营养因子（GDNF），可模拟肠神经-平滑肌信号传导，为研究肠易激综合征提供新平台。
试剂盒核心组分解析
1. 选择性培养基：含5%胎牛血清的基础培养基中，添加了TGF-β1（2 ng/mL）和肝细胞生长因子（HGF），可抑制成纤维细胞过度生长，同时维持平滑肌细胞收缩蛋白（如α-SMA、calponin）的表达。
2. 基质胶预处理板：采用低生长因子Matrigel（稀释度1:30）包被培养皿，既能促进细胞贴附，又可避免过度分化。用户需注意解冻后分装保存，防止反复冻融导致层粘连蛋白降解。
3. 冻存复苏添加剂：含10% DMSO的特定保护剂中混有ROCK抑制剂（Y-27632），可将复苏存活率从常规方法的40%提升至85%以上。
操作流程关键点
1. 原代分离阶段：组织块贴壁法需严格控制胶原酶IV消化时间（建议15分钟间歇振荡），避免肌纤维断裂。离心后建议用40 μm细胞筛过滤，去除未消化的黏膜碎片。
2. 传代时机判断：当细胞密度达80%融合时，用含0.05%胰蛋白酶-EDTA溶液处理3分钟，立即加入含血清中和液。值得注意的是，第3代后细胞增殖能力显著下降，建议冻存备用。
3. 功能验证实验：推荐通过钙离子荧光标记（如Fluo-4 AM）检测乙酰胆碱刺激下的钙瞬变，或采用收缩力测定仪分析细胞对卡巴胆碱的剂量反应曲线。
应用场景拓展
最新研究发现，该试剂盒培养的细胞可用于构建3D肠道类器官共培养模型。例如，与肠神经元共培养时，通过添加胶质细胞源性神经营养因子（GDNF），可模拟肠神经-平滑肌信号传导，为研究肠易激综合征提供新平台。
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