酪胺染料助力斑马鱼嗅觉神经元发育研究
2025-07-23 来源:本站 点击次数:154
根据文献方法部分描述，研究团队在原位杂交（In situ hybridization）中使用了AAT Bioquest的Styramide™ Signal Amplification (PSA™)系统（酪胺信号放大技术），具体用于检测地高辛（DIG）标记的探针。以下是详细解析：
一、标记对象与标记方法
1.标记对象：
①针对斑马鱼嗅觉玫瑰花结（Olfactory Rosette, OR）中的 paqr5b mRNA，使用DIG标记的反义RNA探针（Antisense probe）。
②通过抗地高辛-POD（辣根过氧化物酶）结合探针后，利用酪胺信号放大系统增强荧光信号。
2.标记步骤：
①探针结合：DIG标记的RNA探针与目标mRNA结合
②酶联反应：使用抗DIG-POD抗体（Fab片段）与探针结合。
③信号放大：加入HRP底物（酪胺衍生物Styramide™），在HRP催化下，酪胺底物被激活并共价沉积在目标位点 附近，形成高密度的荧光标记。
二、染料的优点与特点
三、文献中的实验流程与结果
显微图像示例
斑马鱼嗅觉玫瑰花结（OR）的paqr5b mRNA定位（文献图8：左为野生型，右为突变体；红色箭头指示paqr5b mRNA信号缺失）
结果解读：
①野生型斑马鱼OR中，paqr5b mRNA在神经元中高表达（绿色荧光信号）。
②paqr5b⁻/⁻突变体中，信号完全消失，证实基因敲除有效性。
③TSA技术的高灵敏度揭示了神经元亚群中的细微表达差异。
总结
AAT Bioquest的Styramide Signal Amplification系统通过酶促信号放大与高分辨率荧光标记，成为复杂生物样本研究的“黄金标准”。其在低丰度靶标检测、多色复用及精细结构成像中的优势，为神经科学、癌症研究与发育生物学提供了不可替代的技术支持。结合本文案例，该技术未来在单细胞组学与空间转录组学中的应用潜力巨大。
参考文献：https://www.nature.com/articles/s41598-024-74674-0
一、标记对象与标记方法
1.标记对象：
①针对斑马鱼嗅觉玫瑰花结（Olfactory Rosette, OR）中的 paqr5b mRNA，使用DIG标记的反义RNA探针（Antisense probe）。
②通过抗地高辛-POD（辣根过氧化物酶）结合探针后，利用酪胺信号放大系统增强荧光信号。
2.标记步骤：
①探针结合：DIG标记的RNA探针与目标mRNA结合
②酶联反应：使用抗DIG-POD抗体（Fab片段）与探针结合。
③信号放大：加入HRP底物（酪胺衍生物Styramide™），在HRP催化下，酪胺底物被激活并共价沉积在目标位点 附近，形成高密度的荧光标记。
二、染料的优点与特点
| 特性 | TSA技术 | 传统荧光标记 | 碱性磷酸酶系统 |
| 灵敏度 | 提高10-100倍 | 低 | 中等 |
| 空间分辨率 | 高（局部沉积） | 低（扩散背景） | 中等 |
| 多色兼容性 | 支持多通道（FITC/Cy3/Cy5） | 有限 | 需不同显色底物 |
| 适用样本 | 组织切片、低丰度靶标 | 高表达靶标 | 中等表达靶标 |
三、文献中的实验流程与结果
1. 样本固定与切片
↓
2. 探针杂交（DIG标记的paqr5b反义探针）
↓
3. 抗DIG-POD抗体结合
↓
4. Styramide™ PSA信号放大（HRP催化）
↓
5. 荧光显微镜成像
↓
6. 定量分析（如神经元密度与信号强度）
↓
2. 探针杂交（DIG标记的paqr5b反义探针）
↓
3. 抗DIG-POD抗体结合
↓
4. Styramide™ PSA信号放大（HRP催化）
↓
5. 荧光显微镜成像
↓
6. 定量分析（如神经元密度与信号强度）
显微图像示例
斑马鱼嗅觉玫瑰花结（OR）的paqr5b mRNA定位（文献图8：左为野生型，右为突变体；红色箭头指示paqr5b mRNA信号缺失）
①野生型斑马鱼OR中，paqr5b mRNA在神经元中高表达（绿色荧光信号）。
②paqr5b⁻/⁻突变体中，信号完全消失，证实基因敲除有效性。
③TSA技术的高灵敏度揭示了神经元亚群中的细微表达差异。
总结
AAT Bioquest的Styramide Signal Amplification系统通过酶促信号放大与高分辨率荧光标记，成为复杂生物样本研究的“黄金标准”。其在低丰度靶标检测、多色复用及精细结构成像中的优势，为神经科学、癌症研究与发育生物学提供了不可替代的技术支持。结合本文案例，该技术未来在单细胞组学与空间转录组学中的应用潜力巨大。
参考文献：https://www.nature.com/articles/s41598-024-74674-0
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