ELISA试剂盒配对抗体方法
2025-07-31 来源:本站 点击次数:54
ELISA试剂盒中配对抗体方法，也称为双抗夹心法，是一种广泛应用的检测方法，用于定量分析特定的抗原或抗体。这种方法利用了两种特异性抗体，一种作为捕获抗体（也称为包被抗体），另一种作为检测抗体（标记有酶）。以下是配对抗体方法的详细步骤和原理：
1. 包被抗体的固定：
首先，将一种特异性抗体（捕获抗体）固定在微孔板的表面。这种抗体能够特异性地结合目标抗原的一个特定表位。
通过物理吸附或化学方法将捕获抗体固定在聚苯乙烯等固相载体上。
2. 样本加样：
1. 包被抗体的固定：
首先，将一种特异性抗体（捕获抗体）固定在微孔板的表面。这种抗体能够特异性地结合目标抗原的一个特定表位。
通过物理吸附或化学方法将捕获抗体固定在聚苯乙烯等固相载体上。
2. 样本加样：
- 将待测样本（可能含有目标抗原）加入到已包被抗体的微孔板中。
- 样本中的目标抗原与固定在板上的捕获抗体结合。
- 然后，加入另一种特异性抗体（检测抗体），这种抗体能够识别目标抗原的另一个表位，并且通常与酶标记结合。
- 检测抗体与已结合在捕获抗体上的目标抗原形成夹心结构。
- 检测抗体上的酶（如HRP）与显色剂反应，产生颜色变化。
- 颜色的深浅与样本中目标抗原的浓度成正比。
- 根据颜色深浅，通过酶标仪测定吸光度（OD值）来量化目标抗原的浓度。
- 对照标准曲线，可以计算出样本中目标抗原的确切浓度。
- 高特异性：由于使用了两种不同表位的特异性抗体，减少了非特异性结合，提高了检测的特异性。
- 高灵敏度：通过酶放大效应，可以检测到极低浓度的目标抗原。
- 适用广泛：适用于多种类型的抗原，包括蛋白质、多肽和小分子等。
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