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Triizol试剂盒的特点及操作步骤

2025-11-04     来源:本站     点击次数:56

在分子生物学研究中,RNA提取是非常重要的基础步骤,而提取效率和纯度直接影响后续实验的成功。Triizol试剂是一款高效、可靠的核酸提取试剂,为科研人员提供专业解决方案。

Triizol产品特点:
1、高效提取RNA
Triizol试剂基于经典的酸性酚-氯仿分离法,可从细胞、组织、植物等多种样本中快速提取高纯度的RNA。可满足多种实验需求,省时高效。

2、高纯度
提取的RNA具有极高的纯度和完整性,A260/280值通常在1.8-2.0,完全满足分子生物学实验的要求。

3、适用范围广
样本类型:适用于细胞、组织、细菌、酵母和病毒等多种样本。

下游实验:提取的核酸可直用于Northern,点杂交,纯化mRNA,体外翻译,RNase protectionassay,cDNA克隆,以及RT-PCR;也可以用于基因表达芯片分析、高通量测序等对RNA质量要求较高的实验,保证结果的准确性和可靠性。

需要的试剂

试剂名称

应用

Triizol试剂(abs60154)

裂解样本

氯仿

离心后分离出上层水相(含RNA)

异丙醇

沉淀RNA

75%乙醇

洗涤沉淀的RNA

DEPC-ddH2O(abs9259)

溶解RNA

需要的耗材

货号

产品名称

规格

abs7119

1.5mL离心管(无菌无酶)

1箱

abs7118

0.5mL离心管(无菌无酶)

1箱

abs7071

10uL滤芯吸头(盒装,无菌无酶)

1箱

abs7074

200uL滤芯吸头(盒装,无菌无酶)

1箱

abs7077

1000uL滤芯吸头(盒装,无菌无酶)

1箱

abs7176

20uL滤芯吸头(盒装,无菌无酶)

1箱

操作步骤:
1、细胞裂解
★ 组织样本
Triizol用量:每50-100mg组织加1mL Triizol,样品体积不应超过Triizol体积的10%。
(1)将动物或植物组织切成小块,在液氮中磨碎或用匀浆器匀浆处理;
(2)将研磨好的组织粉末快速转入装有1mL Triizol的2mL离心管中,在涡旋振荡器上迅速振荡混匀,置于冰上, 待所有的样品研磨完;
(3)裂解产物应呈澄清的透明粘稠液体。对于富含蛋白、脂肪或多糖物质的组织样品如肌肉、脂肪组织和植物结节部位等,匀浆后仍会存留有不溶物质,可于4℃ 12,000xg离心10min,然后吸取上清至一新的离心管中。

★ 细胞样本
(1)贴壁细胞:吸尽培养液,每10cm²培养面积(6孔板单孔或35mm平皿)加入1mL Triizol,用加样器吹打数次,以确保细胞完全裂解,然后转移至离心管中;

:Triizol的使用量应由培养皿表面 积决定,而非由细胞数目决定。Triizol量不足可能导致提取的RNA中有DNA污染。
(2)悬浮细胞:离心收集细胞,吸尽液体,每5-10×106动植物或酵母细胞,或每1×107细菌细胞加入1mL Triizol, 用加样器吹打,使其完全裂解,然后转移至离心管中。

:添加Triizol前切勿洗涤细胞 ,以免RNA降解。必要时可以用匀浆器来裂解某些细菌或者酵母细胞。

2、液相分离
(1)裂解产物于室温放置5min,使核酸-蛋白复合物完全分离(注:此时样品可在-80℃长期保存);
(2)每1mL Triizol加入0.2mL氯仿,盖紧管盖,剧烈振荡15s,室温放置2-3min;
(3)4℃ 12,000xg离心15min,样品会分成三层:桔黄色的下层有机相,中间层和无色的上层水相;
(4)吸取含总RNA的上层水相至一新的离心管中,吸取水相的体积为所用Triizol试剂的60%。

3、RNA回收
(1)按照每1mL Triizol的最初使用量加入0.5mL异丙醇,颠倒数次混匀,室温放置10min;
(2)4℃ 12,000xg离心10min,弃除上清,可见胶状的RNA沉淀;
(3)按照每1mL Triizol的最初使用量加入1mL 75%乙醇,颠倒数次混匀,洗涤沉淀;
(4)4℃ 12,000xg离心5min,弃除上清;
(5)室温倒置5-10min晾干或真空抽干(不要使用真空干燥离心机,以免RNA过干,难以溶解);
(6)加入适量(如25uL) DEPC-ddH2O或TE缓冲液,用加样器吹打数次溶解RNA;
(7)通过RNA电泳以及紫外分光光度计检测,确定RNA的浓度、纯度和完整性;
(8)所得的RNA应立即使用或适量分装后-80℃保存,避免反复冻融。

仅需几步操作,即可得到高质量的RNA,简便且高效。除Triizol(abs60154)外,Absin还有Triizol(总RNA抽提试剂盒)(abs9331)包含有RNA提取全流程的试剂。

货号

产品名称

规格

abs60154

Triizol

500mL

abs9331

Triizol(总RNA抽提试剂盒)

1kit

abs9259

无酶无菌水

500mL

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