Cellected 是一家提供针对 iPSC 相关技术服务的公司，现有技术路线包括 RIQUEST（用于质量控制）、RESCUE 和 SEED & GO 服务。帮助客户快速、高效地符合 ISSCR（国际干细胞研究协会）标准中关于过程质量控制的要求，帮助挽救出现基因/基因组异常的细胞株，降低 iPSC 分析中的变异性和成本。

本次讲座由 Cellected 的 CEO-Clarie Rechard 博士与大家分享如何使用 VIPS 单细胞铺板仪以及 CMX 单克隆成像仪优化 iPSC 培养条件及大规模筛选单克隆的技术路线，通过 CMX 追踪克隆团生长，快速获取克隆筛选参数如汇合度数值，加速筛选流程。

--讲座内容摘要--

iPSC（诱导多能干细胞），因其应用的广泛性例如：通用型细胞治疗药物、疾病模型、毒性检测甚至细胞肉生产，而备受关注。那么无论何种应用，我们都需要严格的质量控制（QC）来确保高质量的细胞生产。

iPSC 培养过程有很多挑战，例如：

• 不同细胞株差异大，我们需要调整培养基与基质胶的组合达到培养的最优条件；
• 此外，不同批次的培养试剂可能会导致细胞培养结果差异，导致面临一致性差异的挑战，从而增加物料及时间成本。

所以我们应对细胞培养流程进行规律性的 QC，那么何时做，如何做，并非容易确定。良好且高效的 QC 可以降低成本、提高效率、保证产品的可持续性。ISSCR 提供了一些很有帮助的指导原则和建议。对于 iPSC QC 及特性分析，我们主要关注以下三点：

01. 基本因素（包含细胞是否污染、STR 类型，生长、形态等）；

02. 功能性验证（基因表达分析、分化潜能）；

03. 基因组稳定性（CNV/SNV 分析、基因编辑正确性/有无脱靶等）。

何时进行 QC 检测因项目不同而不同，我们一般在以下情况进行 QC 检测，例如在重要项目开始前，在 iPSC 经过编辑或者冻存后以及在细胞培养时，突然出现表型改变或者实验重复性差等阶段。

研究证明 iPSC 细胞株有 20%-30% 的基因突变概率，例如早期证明的 20q11.21 位点的 CNVs，以及最近发现的 TP53、BCOR 的基因突变 ，这些突变随传代次数增加而增加，并对项目产生严重的影响，一旦发现细胞株存在基因突变，能做的改变几乎没有，只能丢弃。那么如何挽救混有突变株的单克隆库？我们需要做亚克隆，并且筛选样本量会非常大，因为我们不知道未突变的细胞群体所占比例。那么，从单克隆筛选手段来讲，手动铺板几乎不可能，所以我们需要一个高效的铺板方式，并且有较高的克隆恢复率。我们使用 Solentim 的 VIPS 单细胞铺板仪结合 CMX 单克隆成像仪进行单克隆筛选，克隆生长追踪，并进行培养基的优化，使克隆恢复率达到最高 70%。最终我们选取单克隆来源且克隆形态符合要求（通过 CMX 成像判断）的克隆团进行基因分析，排除突变细胞株。我们的技术路线能够最大程度减少各类成本。

关于具体的技术路线欢迎观看视频，提纲：

01. 使用 VIPS 单细胞铺板仪及 CMX 单克隆成像仪进行培养试剂优化来提高单克隆恢复率；

02. 通过 VIPS 单细胞铺板仪及 CMX 单克隆成像仪确认单克隆来源性及克隆形态来筛选目的克隆株用于质量检测；

03. 基因组突变筛查。