正确操作人鼻病毒1B型PCR试剂盒的方法
2025-12-19 来源:本站 点击次数:26
样本处理：
采集鼻咽拭子后，将样本振荡混匀，取200μL使用磁珠法提取核酸。
提取后立即检测或-20℃保存（避免反复冻融）。
加样与扩增：
取5μL核酸加入反应管，同步加入阴阳性质控品。
设置三步法PCR循环程序：预变性（95℃ 30秒）、退火（55℃ 30秒）、延伸（72℃ 30秒），共40循环。
结果判读：
荧光定量PCR直接读取Ct值，35-38为弱阳性。
琼脂糖凝胶电泳需观察目标条带（阳性样本出现亮带）。
注意事项
污染防控：
设立独立试剂准备区、样本处理区、扩增区，使用带滤芯吸头。
超净台紫外消毒15分钟，避免裸手接触PCR管。
试剂保存：
-20℃避光保存，运输需低温，避免反复冻融。
操作规范：
严格按说明书操作，不同批次试剂需预实验验证。
记录加样顺序、仪器参数等关键信息。
污染防控措施
1. 实验分区必须严格执行"试剂准备区-样本处理区-扩增区"的单向流动，各区域仪器设备不得混用。每日实验结束后需用10%次氯酸钠擦拭台面，UV照射30分钟。
2. 所有废弃耗材需经121℃高压灭菌处理，特别注意气溶胶污染防控。建议每月使用气溶胶检测试剂盒评估实验室环境状况。
采集鼻咽拭子后，将样本振荡混匀，取200μL使用磁珠法提取核酸。
提取后立即检测或-20℃保存（避免反复冻融）。
加样与扩增：
取5μL核酸加入反应管，同步加入阴阳性质控品。
设置三步法PCR循环程序：预变性（95℃ 30秒）、退火（55℃ 30秒）、延伸（72℃ 30秒），共40循环。
结果判读：
荧光定量PCR直接读取Ct值，35-38为弱阳性。
琼脂糖凝胶电泳需观察目标条带（阳性样本出现亮带）。
注意事项
污染防控：
设立独立试剂准备区、样本处理区、扩增区，使用带滤芯吸头。
超净台紫外消毒15分钟，避免裸手接触PCR管。
试剂保存：
-20℃避光保存，运输需低温，避免反复冻融。
操作规范：
严格按说明书操作，不同批次试剂需预实验验证。
记录加样顺序、仪器参数等关键信息。
污染防控措施
1. 实验分区必须严格执行"试剂准备区-样本处理区-扩增区"的单向流动，各区域仪器设备不得混用。每日实验结束后需用10%次氯酸钠擦拭台面，UV照射30分钟。
2. 所有废弃耗材需经121℃高压灭菌处理，特别注意气溶胶污染防控。建议每月使用气溶胶检测试剂盒评估实验室环境状况。
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