山羊抗兔IgG-HRP抗体在突破转移性乳腺癌免疫瓶颈研究中的应用
2026-01-13 来源:本站 点击次数:76在全球女性恶性肿瘤中，乳腺癌发病率常年居首，而远处转移更是导致患者高死亡率的 “元凶”。尽管免疫治疗革新了肿瘤治疗格局，但乳腺癌固有的 “低免疫原性” 特征，使得细胞毒性 T 淋巴细胞（CTLs）难以浸润肿瘤，免疫响应微弱。如何唤醒肿瘤微环境的 “免疫活性”，成为转移性乳腺癌治疗的关键难题。
近期，发表于《Materials Today》的一项研究，提出了一种 “化疗药介导凋亡-焦亡转换” 的创新策略，通过构建智能纳米平台同步激活适应性与先天性免疫，为转移性乳腺癌免疫治疗提供了新方向。更值得关注的是，该研究中关键的蛋白表达验证实验，离不开 Absin 核心产品的技术支撑。
文献标题：Chemotherapeutics-enabled apoptosis-pyroptosis switch to trigger adaptive and innate immunity for metastatic breast cancer immunotherapy
发表期刊：Materials Today（IF 22）
DOI：https://doi.org/10.1016/j.mattod.2025.01.009
核心试剂：Goat anti-Rabbit IgG-HRP Antibody (abs20040)
研究团队首先明确了乳腺癌免疫治疗的两大核心瓶颈：
- 焦亡执行蛋白不足：焦亡（一种强免疫原性细胞死亡）需 Gasdermin E（GSDME）介导，但乳腺癌细胞中 GSDME 编码基因 DFNA5 因甲基化沉默，导致化疗药难以诱导焦亡；
- 肿瘤 DNA 释放不足：传统 DNA 损伤化疗药无法高效释放肿瘤来源 DNA，且 DNA 酶（DNase）易降解 DNA，难以激活 cGAS-STING 先天性免疫通路。
针对这两个问题，研究团队设计了 “三步走” 解决方案：
- 药物组合优化：选择去甲基化药物地西他滨（DEC）上调 GSDME 表达，DNA 损伤药物7 - 乙基 - 10 - 羟基喜树碱（SN38）激活 caspase-3（介导凋亡）与 cGAS-STING 通路；
- 智能纳米载体构建：打造谷胱甘肽（GSH）响应型纳米平台（命名为PL@SD），表面修饰 PD-L1 阻断肽（PD-L1 pep），实现肿瘤靶向递送；
- 双机制协同激活：PL@SD 在肿瘤内释放 DEC/SN38，一方面通过 “caspase-3 切割 GSDME” 实现凋亡向焦亡转换（释放免疫刺激信号），另一方面通过焦亡孔道促进肿瘤 DNA 释放，激活 cGAS-STING 通路，最终同步唤醒适应性与先天性免疫。
1. 体外验证：DEC+SN38 实现 “凋亡-焦亡转换”，激活 cGAS-STING
- GSDME 上调成功：TCGA 数据库显示，乳腺癌患者 DFNA5（GSDME 编码基因）表达显著低于正常组织（图 2A）；DEC 处理后，4T1 乳腺癌细胞 GSDME 蛋白表达随浓度升高而显著增加（图 2B-C）。
- 凋亡向焦亡转换：单独使用 SN38/DOX/ 顺铂仅诱导 4T1 细胞凋亡（细胞皱缩、凋亡小体，图 2D 白色箭头）；而 DEC 预处理后，细胞出现典型焦亡形态（细胞肿胀、气泡样突起，图 2D 红色箭头）。
- cGAS-STING 通路激活：SN38 处理 4T1 细胞后，其条件培养基能显著上调 DC2.4 细胞中 p-STING、p-IRF3 的表达（图 2E-F），证明肿瘤 DNA 释放可有效激活树突状细胞（DCs）的先天性免疫通路。
2. PL@SD 纳米载体：靶向性与响应性双优
- 理化性质优异：PL@SD 呈球形， hydrodynamic 直径约 96 nm（利于 EPR 效应富集），zeta 电位为 4.95 mV（PD-L1 pep 修饰所致），在 PBS 和 10% FBS 中 30 天内稳定性良好（图 3A-B）；
- GSH 响应释放：肿瘤微环境高 GSH 可触发 PL@SD 解体（直径增至 564 nm，图 3C），120 h 内 SN38/DEC 释放率分别达 64.81%/89.33%，避免正常组织损伤（图 3D）；
- PD-L1 靶向与阻断：PL@SD 对高表达 PD-L1 的 4T1 细胞摄取量是低表达 PD-L1 的 3T3 细胞的 1.49 倍（图 3E-F），且能显著下调 4T1 细胞 PD-L1 表达，逆转化疗诱导的 PD-L1 上调（图 3G-H）。
3. 体内疗效：显著抑制原发肿瘤与肺转移，建立免疫记忆
- 原发肿瘤抑制：在 4T1 乳腺癌模型中，PL@SD 组肿瘤抑制率达 67.64%，显著高于 PL@S（37.73%）和 L@SD（55.97%）组；H&E 染色显示 PL@SD 组肿瘤坏死最严重，Ki67 阳性细胞比例仅 13.32%（图 4A-C）；
- 肺转移阻断：对照组小鼠肺部可见大量转移结节，而 PL@SD 组肺转移结节减少 83.07%（图 4D-E）；
- 免疫记忆建立：肿瘤切除后再接种 4T1 细胞，PL@SD 组小鼠肿瘤生长速率较对照组降低 2.46 倍，且淋巴结中 CD8 + 效应记忆 T 细胞（CD8+ TEM）比例显著升高，证明长期免疫记忆形成（图 4F-G）。
三、Absin 产品助力：Western blot 实验的 “信号检测核心”
在这项研究中，蛋白表达验证是证明机制的关键 —— 无论是 GSDME 的上调、caspase-3 的激活，还是 STING 通路蛋白（STING、p-STING、IRF3、p-IRF3）的检测，都依赖 Western blot 技术。而 Western blot 的信号输出，离不开高效特异的二抗。
研究团队选用的 Goat anti-rabbit IgG-HRP 抗体（Absin 货号：abs20040），正是实现蛋白信号可视化的核心工具：
1. 产品信息- 靶点：兔源 IgG
- 标记物：辣根过氧化物酶（HRP）
- 应用场景：Western blot、ELISA 等（本研究用于 Western blot）
2. 在文中的关键作用
HRP 标记二抗的核心功能是 “连接一抗与化学发光信号”：
- 特异性结合一抗：abs20040 可特异性识别兔源一抗（如抗 GSDME 抗体、抗 caspase-3 抗体、抗 STING 抗体等），确保信号的特异性；
- 催化化学发光：HRP 可催化底物（如 ECL）产生发光信号，使蛋白条带显影，从而实现蛋白表达的定性与定量分析。
在研究的多个关键实验中，abs20040 均发挥了不可替代的作用：
- 验证 DEC 对 GSDME 的上调；
- 检测 caspase-3 切割 GSDME 产生的 GSDME-N 片段；
- 分析 DC2.4 细胞中 STING 通路蛋白的磷酸化水平。
这些实验数据直接支撑了 “DEC 上调 GSDME”“PL@SD 诱导凋亡-焦亡转换”“cGAS-STING 激活” 等核心结论，是研究机制成立的重要证据。
四、总结：科学价值与 Absin 的科研支持这项研究的创新之处在于，将 “表观遗传调控”“细胞死亡类型转换”“纳米靶向递送” 三者结合，为现有化疗药的免疫治疗应用开辟了新路径 —— 无需开发新药物，仅通过优化组合与递送方式，即可显著提升转移性乳腺癌的免疫疗效。
而 Absin 作为科研试剂供应商，始终致力于为研究者提供可靠的实验工具。本次研究中使用的 abs20040 羊抗兔 IgG-HRP 二抗，凭借其高特异性、高灵敏度的特点，助力研究者精准捕获蛋白表达信号，为机制验证提供了稳定的数据支撑。未来，Absin 将继续以优质产品赋能更多肿瘤免疫、纳米医学领域的突破性研究，加速科研成果向临床转化。
文中使用产品| 产品名称 | 货号 | 应用场景 |
|---|---|---|
| Goat anti-rabbit IgG-HRP | abs20040 | Western blot、ELISA |
| 类别 | 货号 | 产品名称 | 规格 |
|---|---|---|---|
| 样本处理 | abs9229 | RIPA裂解液(强) | 100mL |
| abs9116 | 免疫印迹及免疫沉淀用(WB/IP)裂解液 | 100mL | |
| abs9161 | 广谱型蛋白酶抑制剂混合物(不含EDTA,100×DMSO储液) | 1mL | |
| abs9162 | 广谱型磷酸酶抑制剂混合物(100×储液) | 1mL | |
| 蛋白定量 | abs9232 | BCA蛋白定量试剂盒 | 500T |
| 上样 | abs953 | 上样缓冲液(2×) | 10mL |
| abs9829 | 上样缓冲液(5×) | 10mL | |
| Marker | abs924 | 预染蛋白Marker(10-180kDa) | 250uL |
| abs923 | 预染蛋白Marker(10-245kDa) | 500uL | |
| abs90004 | 预染发光Western Marker | 500uL | |
| 电泳 | abs951 | 电泳液(10×) | 1L |
| abs9359 | Tris-Glycine-SDS电泳缓冲液(10×) | 500mL | |
| 预制胶 | Plastic gel、Glass gel等多款预制胶 | ||
| 凝胶试剂盒 | abs9367 | 彩色PAGE快速凝胶试剂盒(10%) | 1kit |
| abs9368 | 彩色PAGE快速凝胶试剂盒(12%) | 1kit | |
| abs9366 | 彩色PAGE快速凝胶试剂盒(8%) | 1kit | |
| 转膜 | abs932 | PVDF膜(0.45μm) | 1卷 |
| abs931 | PVDF膜(0.22μm) | 1卷 | |
| abs960 | NC膜(0.45μm) | 1卷 | |
| abs959 | NC膜(0.22μm) | 1卷 | |
| abs950 | 电转液(10×) | 100mL | |
| 封闭 | abs9175 | 脱脂奶粉 | 500g |
| abs9915 | Western Blot快速封闭液 | 500mL | |
| 一抗孵育 | abs954 | WB专用一抗二抗稀释液 | 100mL |
| WB一抗(3万余产品,多指标覆盖) | |||
| 内参抗体 | abs132001 | Rabbit anti-β-Actin Polyclonal Antibody | 100ug |
| abs830030 | Mouse anti-GAPDH Monoclonal Antibody | 1mL | |
| abs830032 | Mouse anti-β-Tubulin Monoclonal Antibody | 1mL | |
| 二抗 | abs20040 | Goat anti-Rabbit IgG-HRP Antibody | 500uL |
| abs20001 | Goat anti-Mouse IgG-HRP Antibody | 1mL | |
| 显色 | abs9213 | DAB显色试剂盒(紫蓝色,WB) | 1kit |
| abs920 | ECL化学发光检测试剂盒 | 25mL×2 | |
| abs9434 | 超敏型ECL化学发光检测试剂盒 | 25mL×2 | |
| abs9435 | 极敏型ECL化学发光检测试剂盒 | 25mL×2 | |
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