猪 ELISA 试剂盒操作指南：步骤详解与注意事项汇总
2026-01-14 来源:本站 点击次数:294
猪ELISA试剂盒是一种专门用于检测猪体内特定蛋白质或抗体的酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒。这种试剂盒通常用于诊断猪的特定疾病，如伪狂犬病。正确操作猪ELISA试剂盒需要遵循以下步骤和注意事项：
操作注意事项：
1、试剂使用：不同批号的试剂不要混用，未使用的试剂应储存于2-8℃。
2、设备检查：定期检查酶标仪和微量移液器的精度和准备度。
3、样本处理：避免直接接触终止液和底物A、B液；样本不立即使用时应分装保存。
4、加样时避免刮擦板底，确保加样量准确，加样器吸头需清洗干净。
5、试剂应妥善保存于4℃冰箱内，使用时先平衡至室温，不同批号的试剂组分不宜交叉使用。
6、标准品线性回归与预期浓度相关系数 R 值应大于等于 0.9600，特异性不与其它可溶性结构类似物交叉反应，重复性板内、板间变异系数均小于15%。
实验前准备
1、试剂与器材
试剂盒组分：包括包被板、标准品、酶标记抗体、洗涤液、底物（TMB）、终止液等，需按说明书核对。
器材：酶标仪（450nm）、移液器（0.5-1000μL）、37℃恒温箱、洗板机或洗瓶。
洗涤液配制：浓缩洗涤液需按比例稀释（如1:19或1:24），现配现用。
2、样本处理
血清/血浆：离心去杂质（3000rpm，10分钟），避免溶血。
组织样本：需匀浆后稀释（如1g组织+10mL稀释液）。
检测步骤
加样和孵育：
在酶标板上设空白对照1孔、阴性/阳性对照各2孔，未用的板条尽快密封，2～8℃保存。
空白对照孔加样品稀释液100μl；阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照100μl；样品孔每孔加入稀释后的样品100μl。
混匀后，置37℃反应30分钟。
加酶标记物和孵育：
每孔加酶标记物100μl（空白孔除外），37℃反应30分钟。
再次洗涤5次，拍干。
洗涤：
扣去孔内液体，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，拍干。
显色：
每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混匀，37℃避光反应10分钟。
终止反应：
每孔加终止液50μl，混匀。
结果读取：
用空白孔调零，于450nm(可用630nm作参比波长）测定各孔吸光值（A值）。
通过遵循这些步骤和注意事项，可以确保猪ELISA试剂盒的正确操作，获得准确可靠的检测结果。
操作注意事项：
1、试剂使用：不同批号的试剂不要混用，未使用的试剂应储存于2-8℃。
2、设备检查：定期检查酶标仪和微量移液器的精度和准备度。
3、样本处理：避免直接接触终止液和底物A、B液；样本不立即使用时应分装保存。
4、加样时避免刮擦板底，确保加样量准确，加样器吸头需清洗干净。
5、试剂应妥善保存于4℃冰箱内，使用时先平衡至室温，不同批号的试剂组分不宜交叉使用。
6、标准品线性回归与预期浓度相关系数 R 值应大于等于 0.9600，特异性不与其它可溶性结构类似物交叉反应，重复性板内、板间变异系数均小于15%。
实验前准备
1、试剂与器材
试剂盒组分：包括包被板、标准品、酶标记抗体、洗涤液、底物（TMB）、终止液等，需按说明书核对。
器材：酶标仪（450nm）、移液器（0.5-1000μL）、37℃恒温箱、洗板机或洗瓶。
洗涤液配制：浓缩洗涤液需按比例稀释（如1:19或1:24），现配现用。
2、样本处理
血清/血浆：离心去杂质（3000rpm，10分钟），避免溶血。
组织样本：需匀浆后稀释（如1g组织+10mL稀释液）。
检测步骤
加样和孵育：
在酶标板上设空白对照1孔、阴性/阳性对照各2孔，未用的板条尽快密封，2～8℃保存。
空白对照孔加样品稀释液100μl；阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照100μl；样品孔每孔加入稀释后的样品100μl。
混匀后，置37℃反应30分钟。
加酶标记物和孵育：
每孔加酶标记物100μl（空白孔除外），37℃反应30分钟。
再次洗涤5次，拍干。
洗涤：
扣去孔内液体，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，拍干。
显色：
每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混匀，37℃避光反应10分钟。
终止反应：
每孔加终止液50μl，混匀。
结果读取：
用空白孔调零，于450nm(可用630nm作参比波长）测定各孔吸光值（A值）。
通过遵循这些步骤和注意事项，可以确保猪ELISA试剂盒的正确操作，获得准确可靠的检测结果。
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