一．方案背景
莫能菌素作为饲料常用聚醚类抗生素，对防控家禽球虫病、提升畜禽饲料利用率作用关键，其A、B组分含量是否达标，直接决定饲料药效与使用安全，是质量管控核心要点。

目前莫能菌素检测方法多样，常见的有高效液相色谱法、液相色谱-质谱联用法等，不同方法在精准度、适用场景上各有特点。青岛普瑞邦生物工程有限公司依据相关检测标准，特推出柱后衍生-高效液相色谱法专属解决方案，通过Pribolab MDS-3000S柱后衍生器与HPLC方法联用实现精准检测。为保障检测工作科学高效开展，特制定本检测方案。

二、高效液相色谱—柱后衍生
1. 检测原理

    第一步：反相色谱分离，莫能菌素A、B组分的极性和疏水性存在细微差异，在反相色谱柱中，它们与固定相、流动相的相互作用程度不同，会先后被洗脱出来，从而实现两组分的有效分离。

第二步：柱后衍生与紫外检测，分离后的组分流出色谱柱后，会和香草醛-硫酸甲醇衍生液充分混合，发生Komarowsky反应，生成在520nm波长下有特征紫外吸收的有色衍生物；紫外检测器会根据衍生物的吸收强度，与同条件下的标准品吸收信号对比，就能精准定量莫能菌素A、B组分的含量。

2. 仪器方法
2.1 液相方法
·色谱柱：Pribolab®莫能菌素/盐霉素衍生专用色谱柱（货号:EH04079）
·流动相：Pribolab®莫能菌素/盐霉素衍生试剂包（货号:DERE004）
·柱       温：室温
·检测波长：520nm
·进  样  量：20uL
·流       速：0.7mL/min

2.2 衍生方法
·衍生试剂：Pribolab®莫能菌素/盐霉素衍生试剂包（货号:DERE004）
·衍生温度：98℃
·流      速：0.7mL/min

3. 检测结果
3.1  线性
 分别精密吸取50 ug/mL、100ug/mL、200ug/mL、300ug/mL、400ug/mL浓度的对照品溶液，注入液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

3.2 重复性
取浓度为  30 μg/mL 的牛磺酸标准品溶液，连续进样 5 针，记录各针峰面积与保留时间。结果显示，5 针检测的莫能菌素B峰面积相对标准偏差（RSD）为0.78，莫能菌素A峰面积相对标准偏差（RSD）为1.14，符合检测方法学要求。



3.3 系统适用性验证谱图（莫能菌素A与B、甲基盐霉素A与I）


三．方案配置