一、 T细胞抗原受体复合物中的核心信号模块：CD3E/CD3D异二聚体
T细胞抗原受体是介导适应性细胞免疫应答的关键分子，其功能依赖于与CD3复合物的紧密结合。CD3复合物由多个跨膜蛋白亚基构成，其中，CD3ε与CD3δ链形成的异二聚体（CD3E&CD3D Heterodimer）在TCR信号转导的起始与调控中扮演着不可或缺的角色。这一异二聚体不仅参与稳定TCR-CD3复合物的整体结构，其胞内区所含的免疫受体酪氨酸激活基序更是招募并激活下游激酶（如ZAP-70）的初始位点，是T细胞激活级联反应中的首要信号枢纽。因此，针对CD3E/CD3D异二聚体的研究，对于深入理解T细胞活化的分子机制以及开发靶向T细胞的免疫调节疗法具有基础性意义。

二、 工程化策略：构建CD3E&CD3D异二聚体Fc融合蛋白
为获得结构稳定、功能明确的CD3E/CD3D异二聚体研究工具，采用重组蛋白工程技术进行体外构建成为一种高效策略。其核心设计理念是将CD3ε和CD3δ链的胞外结构域通过基因工程手段，与特定的蛋白支架或标签进行融合表达。

1. 异二聚体化与结构稳定性保障：为确保重组蛋白能正确模拟天然CD3E/CD3D的异二聚体构象，常采用"杵臼结构"或类似的异源二聚化结构域。在本构建策略中，采用两种不同亚型的羊驼源Fc片段分别与CD3ε和CD3δ的胞外域融合。由于这两种Fc亚型间具有天然的高选择性配对倾向，能高效驱动并稳定CD3ε与CD3δ链形成1:1的异二聚体复合物，有效避免了同源二聚体的形成，确保了重组蛋白结构与功能的真实性。

2. 功能标签的引入：在构建体中引入羊驼源Fc标签具有多重优势。其一，该Fc标签可作为通用的亲和纯化标签，利用蛋白A或蛋白G层析柱实现重组蛋白的高效、一步法纯化，极大简化了下游工艺。其二，Fc标签的存在可显著延长重组蛋白在体外的半衰期，并可能通过其效应功能（如与Fcγ受体结合）赋予融合蛋白额外的生物学特性，为特定研究目的提供便利。其三，该标签也可作为检测标签，方便使用抗Fc抗体进行Western Blot、ELISA或流式细胞术分析。

三、 CD3E&CD3D异二聚体Fc融合蛋白的主要应用方向
此工程化蛋白为T细胞免疫学研究及药物开发提供了多功能的工具分子。

1. T细胞活化机制研究：作为TCR信号的关键组分，该重组异二聚体蛋白可用于探究TCR-CD3复合物的组装机制、胞外刺激信号如何跨膜传递至胞内ITAM基序、以及不同CD3亚基在信号启动中的具体贡献等基础科学问题。

2. 治疗性抗体与双特异性分子的开发与评价：CD3是构建T细胞重定向双特异性抗体的核心靶点之一。该重组蛋白可作为重要的体外筛选和验证工具，用于评估候选抗体或双特异性分子与天然CD3复合物（特别是CD3E/CD3D位点）的结合亲和力、特异性及其诱导T细胞活化的效力，加速先导分子的优化进程。

3. 诊断试剂开发：针对CD3E/CD3D异二聚体的特异性抗体或检测方法，可用于免疫学相关疾病的诊断或免疫细胞分型。该重组蛋白可作为制备检测抗体的免疫原或建立标准检测方法的阳性对照与校准品。

4. 蛋白-蛋白相互作用研究：利用该纯化的异二聚体蛋白，可以通过表面等离子共振、生物膜干涉技术或共沉淀等方法，研究其与其他免疫相关蛋白（如TCR、共刺激分子、激酶等）的相互作用，绘制更精细的T细胞早期活化相互作用网络。

四、 总结与展望
CD3E&CD3D异二聚体Fc融合蛋白的成功构建，为T细胞生物学研究领域提供了一个结构明确、功能可靠的重要工具。其巧妙的异源Fc二聚化设计不仅解决了重组异二聚体蛋白表达的稳定性难题，还赋予了其便于纯化与检测的实用特性。未来，基于此类精确模拟天然免疫复合物结构的功能性重组蛋白工具，将持续深化我们对免疫细胞信号转导的理解，并为开发新一代的免疫诊断技术与治疗药物提供不可或缺的分子基础与技术支撑。

靶向免疫细胞活化的关键调控组件：CD3E&CD3D异二聚体Fc融合蛋白的构建与应用-南京优爱(UA BIO), 重组蛋白专家