组织解离实验流程及步骤

2026-05-15 来源:本站点击次数:110

组织解离是流式检测、磁珠分选、细胞培养的核心第一步，操作规范直接决定细胞活率、纯度与实验成败。
您已驶入组织解离实验专属路线，本路书为您全程智能领航～
途经五大站点：试剂准备→样本预处理→解离消化→percoll密度梯度分离→流式鉴定，全流程精准踩点、标清操作规范，实验新手也能一路畅通不迷路，稳稳抵达高活率单细胞悬液的终点！

常见小鼠组织样本类型
一、实验前准备-全套试剂耗材

组织样本处理-所用全套试剂耗材

二、样本取材及预处理
1、样本取材

2、组织解离前预处理-结肠

取出整段结肠，置于预冷的无Ca²⁺、Mg²⁺的PBS（PBS）中
清除肠管外的脂肪组织和肠系膜
沿肠系膜侧纵向剪开结肠，在PBS中轻柔漂洗，直至粪便完全洗净
将结肠横向剪成约 5-1.0 cm 的小片段后，进行后续消化处理

3、组织解离前预处理-肺脏

迅速取出完整肺脏
清洗修剪：立即置于预冷的组织保存液或PBS中，仔细去除气管、主支气管及肺门周围的脂肪和结缔组织。
机械解离，用锋利的眼科剪将其剪碎成 5-1 mm³ 的小块

三、标准化组织解离步骤参考（以小鼠肺脏为例）
实验思路框架

样本来源	C57 Mouse
取材	Lung
样本处理	通过消化酶处理为单细胞悬液
分选目的细胞	l CD11B+Myloid髓系细胞 l F4/80 MacroPhage巨噬细胞 l CD8 T细胞

实验所用试剂耗材

产品分类	产品编号	名称	规格
Myloid髓系分选磁珠	S0K0007	CD11b NanoBeads, human and mouse（RUO）	1ml/2ml
巨噬细胞分选磁珠	S0K0012	Anti-F4/80 Nanobeads, mouse（RUO）	1ml/2ml
CD8分选试剂盒	S0K0005	CD8 Nanobeads, mouse（RUO）	1ml/2ml
分选器/磁铁	S0D3004	Starter MagSep Separator (8S)	盒
分选柱	S0D3012	S Separation Columns	25个/盒
分选架	S0D3005	MultiStand	个
分选Buffer	S0D3018	Starter MagSep Separation Buffer	250ml
组织消化解离	abs9482	Tissue Dissociation Solution	10T/25T/50T
筛网	abs7232	70um细胞筛网（200目，白色，底面过滤）	50个/箱
免疫细胞预富集	abs9102	percoll	100ml
10XPBS缓冲液	abs961	PBS缓冲液（10×）	500ml
1640培养基	abs9484	RPMI 1640培养基（含L-谷氨酰胺，不含HEPES）	500ml
红细胞裂解液（1×）	abs9101	RBC Lysis Buffer	100ml
阻断FCR非特异性染色	S0B0599	Mouse FcR Blocking Reagent	200T
染色缓冲液	abs9475	Flow cytometry staining buffer	500ml
流式鉴定	563168	BV711 Rat Anti-CD11b	50ug
流式鉴定	565411	BV421 Rat Anti-Mouse F4/80	50ug
流式鉴定	563068	BV510 Rat Anti-Mouse CD8a	50ug
流式鉴定	561037	APC-Cy™7 Rat Anti-Mouse CD45	100ug

1、组织消化解离

酶消化：将组织块（约100-200mg）转移至离心管，加入 1 mL 组织解离液（难消化可延长）。
摇床孵育：将离心管置于 37℃恒温水平摇床，以 80-100 rpm 的转速孵育 30-40分钟。

70μm 细胞筛网过滤，预冷 1×PBS 3-5mL 冲洗筛网；
4℃、300g 离心 5min，弃上清，4mL 40% Percoll 重悬沉淀；

2、Percoll密度梯度液配置（40%、80%、100%）

100% Percoll溶液：
Percoll细胞分离液与PBS缓冲液(10×)按体积比9:1混合，配制等渗100% Percoll母液
40% Percoll溶液：
用100% Percoll母液和RPMI 1640/1×PBS按体积比4:6混合，配制40%等渗Percoll溶液。
80%Percoll溶液：
用100% Percoll母液和RPMI 1640/1×PBS按体积比8:2混合，配制80%等渗Percoll溶液。

3、Percoll 密度梯度提取目的细胞

建立密度梯度：用4mL 40% Percoll溶液重悬细胞沉淀。在另一15mL离心管底部预先加入5mL 80% Percoll溶液。然后，极其缓慢地将40% Percoll细胞悬液沿管壁加在80% Percoll液面上，形成清晰界面。
离心：在20℃、800×g （升速 1、降速 0）条件下离心 20分钟
收集目标细胞：离心后，管中液体将分层。目标淋巴细胞和髓系细胞会集中在 40%与80% Percoll溶液的界面处，形成一层白色的云雾状细胞层。小心地用吸管将该层细胞吸出，转移至新管中。
加预冷 1×PBS，4℃、300g 离心 5min，弃上清；
细胞染色缓冲液重悬沉淀，备用。

4、细胞计数，活率测定&磁珠分选结果

取10-20μL细胞悬液，与等体积的台盼蓝染液（4%）混合
取适量混合液（通常10μL）加入计数仪专用的一次性计数载玻片
将载玻片插入仪器，自动分析细胞总浓度（cells/mL）、活细胞浓度和活率百分比

5、磁珠分选结果展示

未分选前，小鼠 CD11b

分选后，小鼠CD11b(S0K0012,用量5μl)

未分选前，小鼠 CD8

分选后，小鼠CD8(S0K0005,用量2.5μl)

小优有妙计--新手避坑核心要点
1.组织样本如何延长保存时间？
盛有PBS或培养基的容器放冰上，采集的新鲜组织样本直接放在里面短暂转移处理；如需延长组织的保存时间可以用组织保存液abs9474-100mL（爱必信），4℃可保存48小时。
2,什么情况下需要对组织样本进行纯化和预富集？
组织样本包括免疫组织和非免疫组织。其中，免疫组织：胸腺、脾脏、淋巴结等，免疫细胞占比高；非免疫组织：肿瘤、肝脏、肺脏、肠等，免疫细胞占比低。
当目标细胞在原始样本中占比过低，或存在大量干扰物质时，建议进行预富集，所以非免疫脏器最好过percoll，这是确保下游流式分析或分选实验成功可靠的关键。

常见组织解离试剂盒及结果展示

产品编号	名称	规格
abs50099	Human 肿瘤组织解离试剂盒	10T/25T
abs50090	大鼠/小鼠肿瘤组织解离试剂盒	10T/25T
abs50093	小鼠肠道组织解离试剂盒	10T/25T
abs50092	小鼠肺脏组织解离试剂盒	10T/25T
abs50091	小鼠肝脏组织解离试剂盒	10T/25T
abs50098	小鼠脑组织解离试剂盒	10T/25T
abs50097	小鼠脾脏组织解离试剂盒	10T/25T
abs50095	小鼠肾脏组织解离试剂盒	10T/25T
abs50094	小鼠心脏组织解离试剂盒	10T/25T
abs50096	小鼠胰腺组织解离试剂盒	10T/25T
abs9482	组织解离液	10mL/50ML
abs50217	睾丸组织单细胞解离试剂盒	50T
abs50220	结肠组织单细胞解离试剂盒	50T
abs50216	淋巴结组织单细胞解离试剂盒	50T
abs50224	拟胚组织单细胞解离试剂盒	50T
abs50221	脐带组织单细胞解离试剂盒	50T
abs50223	韧带组织单细胞解离试剂盒	50T
abs50222	视网膜组织单细胞解离试剂盒	50T
abs50219	新生儿心脏组织单细胞解离试剂盒	50T
abs50218	胸腺组织单细胞解离试剂盒	50T

abs9482，组织解离液；

流式-眼睛样本

abs50090，大鼠/小鼠肿瘤组织解离试剂盒

abs50098，小鼠脑组织解离试剂盒

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