随着细胞药物治疗的兴起,细胞程序仪开始越来越多的进入生命科学研究人员的视野。今天的我们主要来讲一讲细胞程序降温仪的分类、原理和优劣势,以及选购程序降温仪的推。
1. 概念
细胞程序降仪是细胞冻存的核心设备,通过精准控制降温速率让细胞处于最佳的降温速率,来减少细胞冷冻过程中冰晶形成的损伤,提高细胞复苏活率。通常细胞的最佳降温速率在0.5-3℃/min区间。
适用的细胞:
(1)原代细胞(如PBMC、AML12)、
(2)免疫细胞(如CAR-T细胞、NK细胞、DC细胞)、
(3)干细胞(如间充质干细胞、诱导多能干细胞)、
(4)神经细胞
(5)生殖细胞(如精子、孵子、胚胎等)
(6)类器官
2. 细胞程序降温仪的分类
细胞程序降温仪依据制冷的类型不同分为两类,分别是:
(1)液氮型程序降温仪:其原理是通过电磁阀精准控制液氮喷入密封腔体,液氮汽化吸热快速降温;通过对液氮喷射量的调节,实现设定的降温曲线。主要特点是:依赖液氮汽化制冷,降温能力强但控温波动大,易液氮压力、环境温度影响。
(2)免液氮型程序降温仪:通过电驱动斯特林制冷机,实现持续稳定制冷,由于为电驱动,其控制精度高,可以主动调节制冷机功率,可实现精准控制。主要特点是:全程电控制冷,可精准跨越细胞相变放热区间(液体转变为固体阶段)。
免液氮型程序降温仪(某企业相关产品型号)
3. 主要技术参数
| 项目 |
液氮型程序降温仪 |
免液氮型程序降温仪 |
| 最低温度 |
-180℃ |
<-110℃ |
| 降温速率 |
0.1-99℃/min |
0.1-10℃/min |
| 控温精度 |
波动大,均匀性±2℃,相变期易“过冲”,(细胞样品速率骤升)。 |
精度高,均匀性±0.5度,相变期降温速率稳定(基于“相变智控”技术)。 |
| 细胞复苏活率 |
相变期速率失控(骤升),易致冰晶损伤,活率波动大。 |
“相变智矩”稳定控温,细胞活率提升10-20%,批内一致性好。 |
| 温度均匀性 |
依赖液氮喷淋均匀度与空气混合,腔体内温差较大。 |
采用金属导热,导热效率高,均匀性好,细胞样品复苏活率批内一致性好。 |
| 细胞复苏活率一致性 |
差 |
好 |
| 运行成本 |
高,需要消耗液氮 |
极低,成为约为液氮型的1% |
| 维护成本 |
中等,需要定期校准电磁阀、清理管路,防止液氮残留堵塞 |
低,无管路,无耗材。 |
| 安全风险 |
高;液氮易冻伤;工作状态下,排放氮气挤占氧气,易引发制氧风险;液氮污染可致样品污染。 |
零风险;无液氮、无挥发性气体、杜绝冻伤与污染。 |
| 使用便捷性 |
差,需额外准备液氮 |
方便,插入电源即可使用 |
| 样品冻存量 |
大 |
一般 |
4、设备选型的核心参数要求
(1)最低温度要小于-80℃:由于大多数情况下,细胞样品低于-50℃时即己进入玻璃态,后续降温速率的快慢对细胞样品复苏活率没有影响。考虑一定的冗余和导热影响,对于程序降温仪的最低温度小于-80℃下,可以满足用户的需求。
(2)最大降温速率不小于5℃/min:由于大多数的细胞的最佳降温速率小于5℃/min,因为选择程序降温仪能实现5℃/min的最大降温速率,即可满足大多数客户需求。
(3)负载:两种程序降温仪均可提供不同规格的产品,用户可根据自身需求来选择相应规格大小的程序降温仪。
(4)批内差异性:对批内差异性要求高的客户,可选择免液氮型程序降温仪。
(5)温度均匀性要求±0.5℃:更好的温度均匀性,可以大大提升细胞样品的批内一致性和批间一致性。
(6)相变智控:优选推荐带“相变智控”补偿技术的程序降温仪,可以避免相变阶段过冲导致的细胞样品温度降温速率骤升的问题,可进一步提升细胞样品的复苏活率。
5、选型避坑不要盲目追求 “最大降温速率”,细胞冻存不需要极速降温,速率过快反而损伤细胞。
(1)只看价格,优先选最便宜的液氮款
短期省钱,长期液氮 + 运维成本远超设备差价,且安全风险高,临床场景绝对不适用。
(2)认为 “温度越低越好”
绝大多数哺乳动物细胞冻存终点温度到 -80℃ 即可,无需 - 180℃超低温,盲目追求低温无意义。
(3)忽略相变区控温能力
这是影响细胞复苏活率的核心,很多低价设备相变段控温失准,活率波动极大。
(4)忽视腔体均匀性腔体温差大,
同一批次样本活率参差不齐,实验数据不可重复。
6、Q&A
6.1 为什么免液氮型程序降温仪的批内一致性比液氮型程序降温仪的好!
A:影响细胞样品复苏活性的主要原因是细胞在冻存过程中,样品的降温速率能否与设定的温度保持一致。在液氮型程序降温仪中,由于采用空气传热热量,其导热系数和热容量远小于采用金属传导的免液氨型程序降温仪,导致其腔内各点的温度差异大和波动大,导致各样品的降温速率差异大,最终导致液氮型程序降温仪的批内差异大。
7、选型小结
(1)如果你是科研型客户或者医药客户的研发阶段,推荐选择免液氮型程序降温仪,其占地小,控温准,特别是带有“相变智控”的程序降温仪,可进一步相变阶段样品温度骤升的问题。
(2)如果你是工业客户,需要进行大规模生产,可根据需求选择适配的液氮型或免液氮型程序降温仪。